20:07
Comentarii Adauga Comentariu

Migrarea celulelor: integrarea semnalelor din față în spate

Migrarea celulelor: integrarea semnalelor din față în spate

Autori: Anne J. Ridley, 1 Martin A. Schwartz, 2 Keith Burridge, 5 Richard A. Firtel, 6 Mark H. Ginsberg, 7 Gary Borisy, 8 J. Thomas Parsons, 3 Alan Rick Horwitz4

Migrarea celulelor este un proces de integrare în mai multe etape care orchestrează morfogeneza embrionară; contribuie la repararea și regenerarea țesuturilor; și conduce progresia bolii în cancer, retard mental, ateroscleroză și artrită. Celula migrată este puternic polarizată cu căi de reglementare complexe care integrează spațial și temporar procesele sale componente. Această revizuire descrie mecanismele care stau la baza pașilor majori ai migrației și căile de semnalizare care le reglează și subliniază progresele recente care investighează natura polarității în celulele migratorii și căile care o stabilesc.

Legătura noastră cu migrația celulară, ca oameni, începe imediat după concepție, ne însoțește pe tot parcursul vieții și adesea contribuie la moartea noastră. Deși fenomenele migratorii sunt evidente încă de la implantare, migrația celulară orchestrează morfogeneza pe tot parcursul dezvoltării embrionare (1).

În timpul gastruării, de exemplu, grupuri mari de celule migrează colectiv ca foi pentru a forma embrionul cu trei straturi rezultat. Ulterior, celulele migrează din diferite straturi epiteliale în locațiile vizate, unde se diferențiază apoi pentru a forma celulele specializate care alcătuiesc diferite țesuturi și organe. Migrații analogice apar la adult. În reînnoirea pielii și a intestinului, celulele epiteliale proaspete migrează din stratul bazal, respectiv din cripte. Migrația este, de asemenea, o componentă proeminentă a reparării țesuturilor și a supravegherii imune, în care leucocitele din circulație migrează în țesutul înconjurător pentru a distruge microorganismele invadatoare și celulele infectate și pentru a curăța resturile. Importanța migrației celulare, totuși, depășește cu mult omul și se extinde la plante și chiar la organismele singele (2).

Migrația contribuie la mai multe procese patologice importante, incluzând boala vasculară, osteoporoza, bolile inflamatorii cronice cum ar fi artrita reumatoidă și scleroza multiplă, cancerul și retardarea mintală. Astfel, înțelegerea mecanismelor fundamentale care stau la baza migrației celulare deține promisiunea abordărilor terapeutice eficiente pentru tratarea bolii, transplantul celular și prepararea țesuturilor artificiale.

În ultimii ani, s-au înregistrat progrese imense în ceea ce privește înțelegerea migrației celulare, inclusiv stabilirea structurilor polare, reglementarea proceselor dinamice ale polimerizării actinei și microtubulilor și reglarea transducției semnalului spațial și temporal. Această revizuire rezumă și evidențiază unele dintre aceste progrese în contextul necesității de a integra și a coordona numeroasele evenimente celulare care compun migrarea.

Ciclul migrației

Prezenta noastră înțelegere a migrării celulelor este un compozit derivat din studiile diferitelor tipuri de celule și medii. În general, migrația celulară poate fi conceptualizată util ca un proces ciclic (3).

Răspunsul inițial al unei celule la un agent de promovare a migrării este polarizarea și extinderea proeminențelor în direcția migrării.

Aceste proeminențe pot fi lamellipodia larga sau filopodia asemănătoare vârfurilor, sunt de obicei conduse de polimerizarea actinei și sunt stabilizate prin aderarea la matricea extracelulară (ECM) sau la celulele adiacente prin intermediul receptorilor transmembranari legați la citoscheletul actinic.

Aceste aderențe servesc drept locuri de tracțiune pentru migrare, pe măsură ce celula se deplasează înainte de ele și sunt dezasamblate la spatele celulei, permițându-i să se detașeze. Interesant, mișcarea foilor de celule prezintă unele caracteristici ale migrării unică a celulei; totuși, polarizarea se extinde peste foaie.

Deși multe aspecte ale acestei imagini sunt împărțite între diferite tipuri de celule, detaliile pot diferi foarte mult.

De exemplu, acești pași sunt observați cel mai distinct în celulele care se mișcă lent, cum ar fi fibroblastele, dar nu sunt la fel de evidente în celulele cu mișcare rapidă, cum ar fi neutrofilele, care par să se alunece peste substrat. În plus, comportamentul migrator al unei celule depinde de mediul său. Celulele somitice care migrează in vivo, de exemplu, prezintă protuberanțe mari și migrații foarte direcționate, spre deosebire de multiplele proeminențe mici pe care le afișează pe substraturi plane; și celulele canceroase își pot modifica morfologia și natura migrației ca răspuns la schimbările de mediu (4, 5).

Mașinile Protrusive

Filamentele actin sunt polarizate intrinsec cu capete "ghimpate" cu creștere rapidă și cu capete "înalte" cu creștere lentă, iar această polaritate inerentă este utilizată pentru a conduce proeminența membranei.

Totuși, organizarea filamentelor depinde de tipul de proeminență: La lamellipodia, filamentele actin formează o rețea "dendritică" ramificată, în timp ce în filopodie ele sunt organizate în legături lungi paralele (6).

Actin de polimerizare în lamellipodia este mediată de complexul Arp2 / 3, care se leagă de laturile sau vârful unui filament actin preexistent și induce formarea unui filament fiica nou care se ramifica de pe filamentul mama (6, 7).

Activarea complexului Arp2 / 3 este localizată de membrii familiei WASP / WAVE, care sunt ei înșiși activate la membrana celulară (6) (a se vedea mai jos).

Împingerea membranei, evenimentul efectiv protruziv, se consideră că nu are loc prin alungirea filamentului actinic, ci printr-un mecanism "elastic cu clichet brun", în care energia termică îndoaie filamentele scurte, stocând energia elastică. Deblocarea unui filament alungit pe marginea anterioară ar asigura apoi forța de antrenare pentru proeminența (7).

Mai multe proteine ​​care leagă actina reglează viteza și organizarea polimerizării actinelor în proeminențe prin afectarea grupului de monomeri disponibili și de capetele libere (7, 8).

De exemplu, profilulin previne auto-nuclearea prin legarea la monomeri de actină și servește, de asemenea, la țintirea selectivă a monomerilor la capete ghimpate. Extinderea filamentelor se termină prin acoperirea proteinelor, restricționând astfel polimerizarea la filamente noi, apropiate de membrana plasmatică.

În plus, dezasamblarea filamentelor mai vechi, care este necesară pentru a genera monomeri de actină pentru polimerizare la capătul din față, este asistată de proteine ​​din familia ADF / cofilină, care sfârșește filamentele și promovează disocierea actinei de la capătul ascuțit. Alte proteine ​​joacă roluri de sprijin în rețeaua dendritică:

Cortactin stabilizează ramurile, în timp ce filamina A și beta -actinina stabilizează întreaga rețea prin reticularea filamentelor (6). Proeminența filopodică se crede că apare printr-un mecanism de frezare a firului de filament, în care filamentele de actină din cadrul unui fascicul sunt alungite la capetele lor ghimpate și eliberează monomerii actinei de la capetele lor ascuțite (6).

Organizarea filamentelor lungi și neramificate este în concordanță cu asamblarea care are loc prin alungire, mai degrabă decât prin nucleare ramificate. Multe proteine ​​sunt îmbogățite la vârfurile filopodiale, incluzând proteinele Ena / VASP care leagă capetele ghimpate ale filamentelor actinice și antagonizează atât captarea, cât și ramificarea, permițând astfel alungirea continuă a filamentelor și fascinului, care îmbină filamentele actinice și astfel ar putea genera rigiditatea necesară împingerea eficientă a membranei plasmatice în filopodia (6).

Figura 1. Celula polarizată. (A) PIP3: localizarea marginea de frunte a fuziunii cu proteine ​​fluorescente verde (GFP) a domeniului PH al Akt / PKB în celulele Dictyostelium de chemotaxie. (Micrograph de R. Meili și R. Firtel.) (B) Integrina fosforilarea a4: Localizarea la marginea de vârf a integrinei fosforilate a4 exprimată în celule CHO migratorii. Localizarea a fost analizată prin imunozălțire cu un anticorp îndreptat împotriva domeniului citoplasmatic de integrină fosforilată a4. [Micrograf de LE Goldfinger și MH Ginsberg, reprodus din The Journal of Cell Biology, 2003, voi. 162, p. 732, prin permisiunea de autor a Universității Rockefeller Press] (C) PTEN: Localizarea unei fuziuni a PTEN în celulele Dictyostelium de chemotaxie. PTEN lipsește de la marginea anterioară, dar este prezentă de-a lungul laturilor laterale și posterior ale celulei. (Micrograph by R. Meili și R. Firtel.) (D) Cancer activat: Racul activat localizează preferențial cu un efector în marginea de vârf a celulelor 3T3 care migrează. Interacțiunea dintre GFP-V12Rac și un domeniu efector a fost analizată prin transfer de energie prin rezonanță de fluorescență (FRET). Interacțiunea îmbunătățită în marginea de vârf se datorează direcționării locale a membranei V12Rac. Roșu și albastru reprezintă intensitățile ridicate și joase ale FRET (respectiv interacțiunii). (Micrograf de M. Del Pozo, WB Kiosses și MA Schwartz.) Interacțiunea îmbunătățită în marginea de vârf se datorează direcționării locale a membranei V12Rac. Roșu și albastru reprezintă intensitățile ridicate și joase ale FRET (respectiv interacțiunii). (Micrograf de M. Del Pozo, WB Kiosses și MA Schwartz.) Interacțiunea îmbunătățită în marginea de vârf se datorează direcționării locale a membranei V12Rac. Roșu și albastru reprezintă intensitățile ridicate și joase ale FRET (respectiv interacțiunii). (Micrograf de M. Del Pozo, WB Kiosses și MA Schwartz.)

Designul supramolecular al lamellipodiei și filopodiei îi conferă capacitatea de a îndeplini funcții distincte. Constatările biofizice sugerează că organizarea dendritică a lamellipodiei asigură o structură ascuțită, asemănătoare periei, care este capabilă să împingă de-a lungul unei lungimi largi a membranei plasmatice (7).

Prin activarea localizată a complexului Arp2 / 3, lamellipodiul ar putea fi indus să crească într-o anumită direcție, oferind baza pentru migrația direcțională. Spre deosebire de acestea, filopodia, cu organizarea lor paralelă, sunt deosebit de bine concepute pentru a servi ca senzori și pentru a explora mediul local, deși nu sunt esențiale pentru chemotaxis.

Proteine ​​familiale Rho: Regulatori centrali de proeminență. Proteinele de legare a guanozinei trifosfatice (GTP) din familia Rho (GTPazele) sunt regulatori pivot ai organizării actinei și aderenței și controlează formarea lamellipodiei și filopodiei.

Ele sunt reglementate conformațional de legarea GTP și PIB: Când sunt legați la GTP, aceștia sunt activi și interacționează cu proteinele țintă din aval, care includ proteine ​​kinaze, enzime modificatoare de lipide și activatori ai complexului Arp2 / 3 (9).

Rho GTPazele sunt activate de factorii de schimb de nucleotide de guanină (GEF) și inactivate de proteinele de activare a GTPazei (GAPs).

Dintre GTPazele Rho, Rac, Cdc42 și RhoG sunt necesare pentru proeminența lamellipodiei și filopodiei. Obiectivele majore pentru Rac și Cdc42 care mediază polimerizarea actinei în proeminențe sunt familia WASP / WAVE a activatorilor complexului Arp2 / 3.

Rac-ul stimulează extinderea lamellipodială prin activarea proteinelor WAVE (10).

Cdc42 se leagă de proteinele WASP și stimulează in vitro complexul Arp2 / 3 pentru a induce polimerizarea actinei dendritice (6).

Cu toate acestea, această interacțiune nu poate explica capacitatea Cdc42 de a induce filopodia, deoarece celulele care nu au WASP sunt încă capabile să formeze filopodia (11); și, așa cum s-a descris mai sus, filopodia conține filamente actinice paralele și nu o rețea dendritică.

RhoG nu interacționează direct cu WASP, ci pare să acționeze în amonte de Rac prin legarea și activarea unui complex Rac-GEF (12).

Proteinele WAVE / WASP pot regla ele însele activitatea Rac și Cdc42 prin legarea la GAP și GEF (13-15) și ar putea genera bucle de feedback pozitive sau negative pentru a regla extinderea polimerizării actinei indusă de Cdc42 / Rac.

Proteinele WAVE / WASP pot fi de asemenea reglate de alți stimuli, în afară de Cdc42 și Rac, incluzând kinazele familiei Src, proteinele adaptorului Nck și WIP și fosfoinozitidele (7, 14, 16-19).

Polarizarea celulei: Piatra de temelie a migrației

Pentru ca o celulă să migreze, trebuie să fie polarizată, ceea ce înseamnă că procesele moleculare din față și din spate ale unei celule în mișcare sunt diferite.

Stabilirea și menținerea polarității celulare ca răspuns la stimulii extracelulare par să fie mediate de un set de bucle de feedback pozitiv interconectate care implică GTPazele familiei Rho, 3-kinazele fosfoinositide (PI3K), integrinele, microtubulele și transportul vezicular (figurile 1 și 2).

Deși următoarea discuție sintetizează informații din mai multe sisteme celulare, contribuțiile relative ale diferitelor semnale depind de tipul celular și de stimulul specific.

Cdc42: Un regulator principal al polarității celulelor.

Cdc42 este un regulator principal al polarității celulare în organismele eucariote, de la drojdie la om. Cdc42 este activ în fața celulelor migratorii (20), iar inhibarea și activarea globală a Cdc42 pot perturba direcționalitatea migrației (9).

O modalitate în care Cdc42 influențează polaritatea este prin restrângerea unde se formează lamellipodia (21) (a se vedea mai jos). Cdc42 poate afecta polaritatea prin localizarea centrului de organizare a microtubulelor (MTOC) și a aparatului Golgi în fața nucleului, orientat spre marginea de vârf.

Orientarea MTOC indusă de Cdc42 poate contribui la migrarea polarizată prin facilitarea creșterii microtubulilor în livrarea mediată de lamele și microtubuli a veziculelor Golgiderived la marginea de vârf, asigurând membrană și proteinele asociate necesare pentru proeminența în față (9, 22).

Reorganizarea MTOC pare a fi mai importantă pentru migrarea celulelor care se mișcă lent, deoarece în celulele în mișcare rapidă, cum ar fi neutrofilele și celulele T, se află de obicei în spatele nucleului (23).

Efectele Cdc42 asupra poziției MTOC par a fi exercitate în principal printr-o cale care implică efectul Cdc42 PAR6, care există într-un complex cu PAR3 și o proteină kinază C atipică (aPKC) (24).

Mecanismul molecular prin care complexul PAR6 / PAR3 / aPKC orientează MTOC este incomplet înțeles, dar dovezile recente sugerează că acesta ar putea apărea ca urmare a capturii locale a microtubulilor la marginea de vârf prin APC, o proteină care leagă tubulina și se localizează capetele microtubulilor (9), prin intermediul CLIP170 și IQGAP (22) și / sau prin intermediul complexului de proteine ​​motorină dineină / dinactină pe bază de microtubuli (24).

O țintă descendentă a Cdc42, kinaza PAK1, poate în sine să medieze activarea Cdc42 în aval de receptorii legați de proteina GTP-proteină legată de GTP (proteină G), care sunt activate de mai mulți chemoatractanți. Aceste interacțiuni definesc o buclă de feedback pozitivă între Cdc42 și PAK1, rezultând o activitate Cdc42 ridicată la marginea de vârf (25).

Alte bucle de feedback care implică integrine pot, de asemenea, să contribuie la menținerea activării Cdc42 locale (9, 26). PI3K și PTEN: Amplificatoarele de gradient. Un aspect surprinzător al chemotaxiei este capacitatea celulelor de a răspunde direcțional la gradiente foarte cheioate de chemoattractant (mai puțin de o diferență de 10% în concentrația de chemoatractant dintre partea din față și cea din spate a unei celule) (27).

O astfel de diferență mică în semnalizarea între față și spate trebuie să fie amplificată în gradiente de semnalizare intracelulare mai abrupte, pentru a genera un răspuns celular.

Fosfoinozitidele PtdIns (3,4,5) P3 (PIP3) și PtdIns (3,4) P2 [PI (3,4) P2] sunt molecule cheie de semnalizare care devin rapid și puternic polarizate în celule expuse la un gradient de chemoattractant (figura 2).

Acest proces de amplificare implică atât acumularea localizată, cât și activarea PI3K, care generează PIP3 / PI (3,4) P2 și fosfataza PTEN, care le îndepărtează.

În Dictyostelium, de exemplu, PI3K-urile se acumulează rapid la marginea anterioară a celulelor ca răspuns la un chemoattractant, în timp ce PTEN devine restrânsă la laturi și la spate (27, 28) (Figura 1).

Celulele cu activitate modificată PI3K sau PTEN pot, de obicei, migra, dar prezintă o capacitate semnificativ redusă de a se deplasa direcțional pe un gradient de chemoattractant. Deși nu este clar încă ce reglează localizarea PI3Ks, activarea Cdc42 este implicată în excluderea PTEN de la proeminențele în leucocite și PIP3 pare să fie necesară pentru localizarea activității Cdc42 (25).

Aceste rezultate implică faptul că există o rețea de bucle pozitive de reacție între produsele Cdc42, PI3K și PTEN care colaborează pentru inițierea și menținerea polarității celulelor migratorii, deși un paralog Cdc42 nu a fost încă identificat în Dictyostelium.

Activarea Racului Localizat: Inițierea și menținerea proeminenței. Cum Cdc42 și PI3K conduc la activarea mașinilor de polimerizare a actinei necesare pentru proeminența activă?

Evenimentul cheie pare să definească locul în care Rac este activ (figura 1). Acest lucru se realizează probabil prin activarea sau livrarea unui factor de schimbare la nivel local și, de fapt, mai multe GEF-uri de Rac sunt activate de produsele PI3K (29).

Odată ce Racul este activ, au fost identificate mai multe bucle de reacție care ajută la menținerea proeminențelor direcționale. În primul rând, Rac poate stimula în sine recrutarea și / sau activarea PI3K la membrana plasmatică, care apoi acționează în amonte de Rac cu GEF-uri cu raze sensibile la PIP3 (21, 29).

În al doilea rând, microtubulii și Rac pot forma o buclă de feedback pozitiv în care polimerizarea microtubulilor activează Rac, iar Rac la rândul său stabilizează microtubulii (22).

În al treilea rând, implicarea integrinei conduce la activarea Rac și direcționarea cu membrană (30), astfel încât aderențele noi formate la marginea anterioară vor stimula Rac, care, la rândul său, induce recrutarea și gruparea integrinelor activate la marginea lamellipodiei (31,32). PIP3 contribuie, de asemenea, la activarea integrinei (33) și poate astfel să sporească și mai mult feedback-ul pozitiv pentru Rac.

Definirea coada. Este restricția PIP3, Cdc42 activă și Rac la partea din față a celulei suficientă pentru a face ca partea din spate a celulei să urmeze partea din față? În mai multe tipuri de celule, inhibarea Rho conduce la formarea unei coada extinsă, posibil datorită faptului că contractilitatea bazată pe actomozină în corpul celulei este scăzută. Rho poate de asemenea să acționeze în coadă prin stabilizarea microtubulilor, ceea ce ar favoriza apoi o creștere a focarului (vezi mai jos) (22, 34).

Un model pentru modul în care celulele migratoare mențin polaritatea se bazează pe faptul că Rho și Rac sunt reciproc antagoniști, fiecare suprimând activitatea celuilalt (35).

Racul activ la marginea anterioară a celulelor ar suprima activitatea Rho, în timp ce Rho ar fi mai activ în părțile laterale și din spate ale celulei și va suprima activitatea Rac, împiedicând astfel proeminența Racmediated la alte locuri decât marginea de vârf (36, 37). Totuși, Racul activ a fost implicat în detașarea în spatele celulelor migratorii (38), și, de asemenea, Rho poate duce la activarea Rac (39).

Integrine și aderarea la migrație Pentru a avea loc o migrare, trebuie să se formeze o proeminență și apoi să se stabilizeze prin atașarea la împrejurimi. Deși mulți receptori diferiți sunt implicați în migrarea diferitelor tipuri de celule, integrinele sunt o familie majoră de receptori care promovează migrarea. Acești receptori acționează ca "picioare" ale unei celule migratoare prin susținerea adeziunii la ECM sau alte celule și prin legarea prin adaptoare cu filamente de actină în interiorul celulei. După cum este descris mai sus, integrinele activează moleculele de semnalizare legate de migrare. Sunt, de asemenea, destinatari ai "insideFig.

2. Etapele migrării celulelor. Polaritatea este intrinsecă unei celule migratorii (A).

Cdc42, împreună cu proteine ​​Par și aPKC, sunt implicate în generarea polarității. Mai multe proteine ​​suplimentare sunt implicate în polaritate, ceea ce conduce la traficul de vezicule direcționat către marginea de vârf, organizarea microtubulilor (în unele celule) și localizarea MTOC (în unele celule) și a aparatului Golgi în fața nucleului. În prezența unui agent chemotactic, PIP3 este produs la marginea de început prin acțiunea localizată a PI3K, care se află la marginea de vârf, și PTEN, o fosfatază PIP3 care se află la marginile celulare și în spate. PTEN și miozina II sunt implicate în restrângerea proeminențelor spre frontul celular. Ciclul de migrare începe cu formarea unei proeminențe (B).

Actriminarea polimerizată, la rândul ei, este reglementată de proteine ​​care controlează disponibilitatea monomerilor activin activi (profilin) ​​și proteinele de debranșare și depolimerizare (ADF / cofilină), precum și proteinele de acoperire și de separare. Protruziile sunt stabilizate prin formarea de aderențe. Acest proces necesită activarea integrinei, gruparea și recrutarea componentelor structurale și de semnalizare la aderențele în vârstă. Integrinele sunt activate prin legarea talinei și prin căile mediate de PKC-, Rap1- și PI3K. Integrina se caracterizează prin legarea la liganzi multivalenți și este reglementată de Rac. La spatele celulei, aderențele se demontează în timp ce spatele se retrage (C). Acest proces este mediat de mai multe căi de semnalizare care pot fi asociate, care includ Src / FAK / ERK, Rho, myosin II, calciu, calcineurin, calpain, și livrarea componentelor prin microtubuli. Multe dintre aceste molecule pot, de asemenea, să regleze dezasamblarea aderențelor la semnalizarea din fața celulelor "; adică, activarea la o stare de înaltă afinitate prin semnale citoplasmatice (40).

Integrinele sunt receptori heterodimerici constând din: și lanțuri cu domenii extracelulare mari de legare a ligandului și domenii scurte de citoplasmă. Legarea liganzilor la porțiunea extracelulară a integrinelor conduce la modificări conformaționale în receptori prin schimbarea interacțiunilor dintre domeniile citoplasmatice a-și-lanț (41) și la gruparea integrinelor. Această combinație de ocupare și grupare inițiază semnale intracelulare, cum ar fi fosforilarea proteinei tirozinei, activarea GTPazelor mici și modificările biosintezei fosfolipidelor care reglează formarea și întărirea siturilor de adeziune, organizarea și dinamica citoscheletului și polaritatea celulară în timpul migrației (40 ).

Deși integrinele în sine nu au activitate catalitică, semnalele sunt transmise prin interacțiuni directe și indirecte cu mulți parteneri ai integrinei.

Integrinele activate sunt localizate preferențial la muchia de vârf, unde se formează noi aderențe (31).

Interesul integrinei este reglat în mare parte prin modificări în conformația domeniilor extracelulari de integrină care rezultă din interacțiunile la coada citoplasmatică a integrinei (42).

Activarea intermediarilor cheie, cum ar fi GTPaza Rap1 sau PKC, crește afinitatea integrinei. În schimb, activarea kinazei Raf-1 suprimă adesea activarea integrinei (43). Proteina talinică a legăturii citoscheletale promovează activarea integrinei prin legarea la un subset de cavități de subunități de integrină și prin interacțiunile cu coada subunității integrinei a (42, 44).

Potențialul de semnalizare al integrinelor poate fi, de asemenea, modificat prin modificări posttranslaționale ale domeniilor citoplasmatice. De exemplu, fosforilarea integrinei a4 pe serină blochează legarea paxilinei, o proteină adaptor de semnalizare. În celulele migratoare, fosforilarea a4 la marginea de vârf (Fig.1) și eliberarea consecutivă a paxillinului legat sunt necesare pentru a menține lamellipodia stabilă a celulelor care migrează pe liganzi pentru integrina A41 (45).

Formarea aderențelor.

Mecanismul prin care aderențele se asamblează în celulele migratorii este o provocare majoră care abia începe să fie abordată. Se presupune că începe cu clusterizare pe scară mică datorită naturii multivale a ECM la care celulele aderă. Unele celule, în special cele cu migrație rapidă, cum ar fi leucocitele, au puține clusteri vizuale de integrină, deci aderențele submicroscopice foarte mici sunt probabil importante pentru migrarea lor.

În alte celule, aderențele mici cunoscute ca complexe focale pot fi observate la marginea de vârf. Formarea acestor adeziuni depinde de Rac și Cdc42, iar aceste aderențe stabilizează lamellipodiul prin medierea atașamentului la ECM, contribuind astfel la migrarea eficientă. Cu toate acestea, celulele cu clustere de integrină mari ("adheziile focale") sunt strâns aderente și sunt de obicei fie nemigrative, fie se mișcă foarte încet. Asamblarea aderențelor focale implică Rho, precum și contractilitatea indusă de miozină.

În timpul formării lor, unele componente ale proteinei intră în aderență cu cinetică similară, ceea ce sugerează că acestea există în complexe citoplasmatice preformate (46). Cu toate acestea, alte componente intră în aderențe cu o cinetică foarte distinctă, care este în concordanță cu un model în care un eveniment de reglementare inițiază adăugarea în serie a diferitelor proteine. Paxilina, de exemplu, este prezentă în aderențele născute, în timp ce a-actinina apare mai vizibil în aderențele "mai vechi" (46).

Forțe tracționale.

Prin conectarea ECM la citoscheletul intracelular, integrinele servesc ca ambele situsuri de tracțiune peste care se mișcă celula și ca mecanosensori, transmiterea informației despre starea fizică a ECM în celulă și modificarea dinamicii citoscheletale (3, 47, 48).

Deoarece celulele migratorii trebuie să fie capabile să se detașeze, totuși să exercite tracțiune pe substrat, viteza de migrare este o funcție bifazică a forței atașamentului celular.

Aceasta din urmă este determinată de densitatea liganzilor adezivi pe substrat, de densitatea receptorilor de adeziune pe celule și de afinitatea receptorilor pentru liganzii adezivi (3). Astfel, schimbările în oricare dintre acești parametri pot avea un efect dramatic asupra migrației.

Forța transmisă la site-urile de aderență derivă din interacțiunea miozinei II cu filamentele actinice care se atașează la aceste situsuri. Activitatea miozinei II este reglată prin fosforilarea cu lanț ușor de miozină (MLC), fie direct pozitiv reglată de kinaza MLC (MLCK) sau Rho kinaza (ROCK) sau reglată negativ de fosfatază MLC, care este ea însăși fosforilată și inhibată de ROCK.

În timp ce MLCK este reglată de concentrația intracelulară a calciului, precum și de fosforilarea unui număr de kinaze, ROCK este reglat prin legarea lui Rho-GTP (49). MOS fosforilarea activează miozina, ducând la creșterea contractilității și transmiterea tensiunii în zonele de adeziune. În celulele migratoare, cele mai puternice forțe au fost raportate a fi transmise complexelor focale de la marginea de conducere și regiunile de retragere din spate (47). Dimpotrivă, în mai multe celule adezive, forța transmisă printr-o aderență focală la substrat este proporțională cu aria de secțiune transversală (50) a aderenței. Este surprinzător faptul că forțele tracționale măsurate în multe studii depășesc cu mult ceea ce ar trebui să fie necesar pentru translocarea celulară. O explicație este că celulele din cultura de țesut pot răspunde la un mediu "rănit" care activează Rho și astfel stimulează contractilitatea. Deoarece forțele de tracțiune sunt distribuite inegal asupra celulelor migratorii, semnalizarea integrinei este un mijloc de a raporta aceste diferențe de forță celulei.

Îndepărtarea aderenței în față. Îndepărtarea aderenței se observă atât la marginea anterioară, cât și în partea din spate a celulei, unde aceasta promovează retragerea coastei. La partea frontală a celulelor migratorii, aderențele la baza unei proeminențe se demontează, pe măsură ce se formează noi aderențe la marginea anterioară (46).

Cu toate acestea, unele aderențe persistă și se maturizează în structuri mai mari, mai stabile. Se știe puțin despre dezasamblarea aderenței în raport cu maturarea; totuși, orientarea microtubulilor a fost implicată ca un factor care promovează demontarea aderenței (34).

Ambele proteine ​​kinaze și fosfataze par a fi, de asemenea, centrale pentru reglarea ruperii aderenței și a stabilității (51).

De exemplu, celulele care nu au tirozin kinazele FAK sau Src au aderări mai mari și mai mari și migrează prost (46, 52).

Interacțiunea dintre FAK și Src și proteinele adaptorului Cas și Crk, care la rândul său acționează GEF specifice pentru cancer, pare să reglementeze cifra de aderență. Cresterea aderentei in celulele migratorii este, de asemenea, reglata de un complex de proteine ​​asociate cu Rac (53) si de proteina kinaza activata de mitogen ERK (54).

Dovezile emergente favorizează un model de rulare a aderenței în care activarea tirozin kinazelor proteice FAK și Src însoțește formarea unui complex de semnalizare de adeziune care, la rândul său, mediază activarea localizată a Rac și ERK.

Aceste semnale contribuie apoi la rularea aderențelor la marginea de vârf. Demontarea și retragerea aderenței în spate.

În partea din spate a celulelor migratorii, aderențele trebuie, de asemenea, să fie dezasamblate. În fibroblaste, aderențele cel mai din spate adesea fixează celula puternic către substrat, rezultând o coadă lungă la locul de ancorare. Tensiunea poate fi suficientă pentru a rupe fizic legătura între integrină și citoscheletul actin, rezultând că integrina este lăsată în urmă în timp ce restul celulei se deplasează; un comportament similar a fost observat in vivo (3).

Tensiunea ridicată exercitată asupra aderențelor din spate contribuie la detașare (3). Câteva linii de dovezi indică un rol pentru myosin II în acest eveniment, precum și pentru menținerea polarității.

Celulele Dictyostelium deficiente în miozina II sau în regulatorul său PAKa prezintă retractare deteriorată și formarea de pseudopodii multiple de-a lungul părților laterale ale celulei (55). Un fenotip similar este observat în monocite sau neutrofile în care asocierea miozinei II este blocată prin inhibarea Rho sau Rho kinazei (36, 37). AlR, deși această retragere contribuie la mișcarea netă a celulelor migratorii, poate contribui și la polaritate, deoarece eliberarea aderențelor la spatele celulei este într-un fel cuplată cu o activitate protruzivă crescută din față.

FAK, Src și ceilalți regulatori ai rulajului aderenței din față par să funcționeze și în spate. În plus, nivelurile intracelulare de calciu sunt implicate în dezasamblarea aderențelor din spate. Tensiunea generată în celulele migratorii prin aderențe puternice în spate poate fi suficientă pentru a deschide canalele de calciu activate prin întindere (56). Obiectivele potențiale pentru calciu sunt calcineurina fosfatazei cu calciu și calcaina protează activată de calciu, care este de asemenea activată de ERK și are potențialul de a ceda mai multe proteine ​​de adeziune focală, inclusiv integrine, talin, vinculin și FAK (57, 58) .

Un model molecular pentru migrarea celulară

Informațiile discutate mai sus pot fi asamblate într-un model care apare pentru modul în care celulele se polarizează și migrează (figura 2). Celulele migrează direcțional ca răspuns la o varietate de indicii, incluzând gradienți de chemokine, factori de creștere sau molecule ECM.

Acești factori implică receptorii de suprafață celulară, inițiând o cascadă de evenimente, incluzând activarea proteinelor G sau tirozin kinazelor, stimularea GEF pentru Cdc42 și activarea kinazelor lipidice și recrutarea ulterioară a Racului activat.

Activarea locală a Rac și / sau Cdc42, în concert cu alte organisme de reglementare, cum ar fi proteinele familiei WASP / WAVE și complexul Arp2 / 3, stimulează formarea unei rețele de filamente actinice ramificate la marginea anterioară, care la rândul său induce o proeminență în direcția migrației.

Polimerizarea actinei este reglată de proteinele care acoperă filamentele de creștere, separă porțiunile mai vechi ale filamentelor existente și controlează disponibilitatea monomerilor de actină activat. Activarea localizată a Cdc42 și Rac scade activitatea Rho și îmbunătățește activitatea PI3K și producția de PI (3,4) P2 / PIP3 la marginea de vârf. Cdc42 contribuie, de asemenea, la polarizarea celulară prin mediarea reorientării MTOC către frontul celular, conducând la creșterea microtubulilor și la eliberarea veziculelor în această regiune. Integrinele și alte molecule de adeziune sunt activate de PI3Ks, PKCs și / sau Rap prin talin și stabilizează proeminența prin legături structurale cu filamentele actinice. Ei, de asemenea, semnal pentru Rac, care promovează recrutarea de integrine suplimentare și formarea de aderențe.

Aderențele noi la marginea de vârf întăresc activitățile Rac, Cdc42 și PI3K, în timp ce formarea unui gradient al activității Rho care este scăzută la marginea de vârf și mai în spate și în lateral împiedică activitatea Racului în față. Polarizarea este adesea însoțită de sensibilizarea receptorilor la marginea de vârf, favorizând astfel mișcarea continuă în aceeași direcție.

Adeziunile transmit forțe propulsive și servesc ca puncte de tracțiune peste care se mișcă celula. Ciclul de migrație este finalizat deoarece dezasamblați aderențele și retrageți spatele. Dezasamblarea aderențelor este controlată de căi care includ FAK, ERK, Src și calpaina de protează, precum și dinamica microtubulelor. Retragerea în spate necesită Rho kinază și este un proces mios independent.

Eliberarea aderențelor din spate și din față par să aibă unele mecanisme comune și sunt asociate cu formarea de protuberanțe din față. Deplasarea în direcția migrației Cercetarea în baza moleculară a migrării celulelor a progresat rapid în ultimii ani. Principalele molecule de reglementare au fost identificate și mecanismele proceselor componente au fost elucidate, oferind obiective potențiale pentru intervenția terapeutică în bolile care implică migrarea celulelor.

Cu toate acestea, există încă multe probleme nerezolvate cu privire la modul în care celulele își stabilesc și mențin polaritatea, modul în care se formează și se dispersează aderențele, modul în care celulele migrează in vivo și modul în care celulele își recunosc țintele. În plus, nu știm prea multe despre modul în care procesele componentelor segregate spațial sunt integrate temporal și spațial în celulă.

Acest lucru va necesita tehnologii care să recunoască, să cuantifice și să perturbe semnalele localizate, precum și metode de vizualizare și caracterizare a dinamicii evenimentelor localizate care sunt sub rezoluția microscopului luminos. Alte provocări includ determinarea când și unde se formează și dispersează complexe moleculare importante, elucidarea structurilor complexelor supramoleculare care conduc migrația, acumularea datelor cantitative asupra dinamicii și concentrațiilor moleculare și dezvoltarea modelelor proceselor componente și integrarea lor. În cele din urmă, va trebui să studiem aceste detalii moleculare în celulele care migrează in vivo. Deși unele dintre aceste întrebări și provocări par a fi descurajante în prezent, viitorul pare luminos, pe măsură ce tehnologiile imagistice, structurale, moleculare și transgenice continuă să se îmbunătățească.



Cell Migration: Integrating Signals from Front to Back

Anne J. Ridley,1 Martin A. Schwartz,2 Keith Burridge,5 Richard A. Firtel,6 Mark H. Ginsberg,7 Gary Borisy,8 J. Thomas Parsons,3 Alan Rick Horwitz4

Cell migration is a highly integrated multistep process that orchestrates embryonic morphogenesis; contributes to tissue repair and regeneration; and drives disease progression in cancer, mental retardation, atherosclerosis, and arthritis. The migrating cell is highly polarized with complex regulatory pathways that spatially and temporally integrate its component processes. This review describes the mechanisms underlying the major steps of migration and the signaling pathways that regulate them, and outlines recent advances investigating the nature of polarity in migrating cells and the pathways that establish it.

Our liaison with cell migration, as humans, begins shortly after conception, accompanies us throughout life, and often contributes to our death. Although migratory phenomena are apparent as early as implantation, cell migration orchestrates morphogenesis throughout embryonic development (1).

During gastrulation, for example, large groups of cells migrate collectively as sheets to form the resulting three-layer embryo. Subsequently, cells migrate from various epithelial layers to target locations, where they then differentiate to form the specialized cells that make up different tissues and organs. Analogous migrations occur in the adult. In the renewal of skin and intestine, fresh epithelial cells migrate up from the basal layer and the crypts, respectively. Migration is also a prominent component of tissue repair and immune surveillance, in which leukocytes from the circulation migrate into the surrounding tissue to destroy invading microorganisms and infected cells and to clear debris. The importance of cell migration however, goes far beyond humans and extends to plants and even to singlecelled organisms (2).

Migration contributes to several important pathological processes, including vascular disease, osteoporosis, chronic inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis and multiple sclerosis, cancer, and mental retardation. Thus, understanding the fundamental mechanisms underlying cell migration holds the promise of effective therapeutic approaches for treating disease, cellular transplantation, and the preparation of artificial tissues.

Over the past few years, immense progress has been made in understanding cell migration, including the establishment of polar structures, the regulation of the dynamic processes of actin and microtubule polymerization, and the regulation of spatial and temporal signal transduction. This review summarizes and highlights some of these advances in the context of the need to integrate and coordinate the many cellular events that compose migration.

The Migration Cycle

Our present understanding of cell migration is a composite derived from studies of different cell types and environments. In general, cell migration can be usefully conceptualized as a cyclic process (3).

The initial response of a cell to a migration-promoting agent is to polarize and extend protrusions in the direction of migration.

These protrusions can be large, broad lamellipodia or spike-like filopodia, are usually driven by actin polymerization, and are stabilized by adhering to the extracellular matrix (ECM) or adjacent cells via transmembrane receptors linked to the actin cytoskeleton.

These adhesions serve as traction sites for migration as the cell moves forward over them, and they are disassembled at the cell rear, allowing it to detach. Interestingly, the movement of cell sheets shows some features of single-cell migration; however, the polarization extends across the sheet.

Although many aspects of this picture are shared among different cell types, the details can differ greatly.

For example, these steps are observed most distinctly in slow-moving cells such as fibroblasts, but are not as obvious in fast-moving cells such as neutrophils, which seem to glide over the substratum. In addition, a cell’s migratory behavior depends on its environment. Somitic cells migrating in vivo, for example, show large single protrusions and highly directed migration, in contrast to the multiple small protrusions they display on planar substrates; and cancer cells can modify their morphology and nature of migration in response to environmental changes (4, 5).

The Protrusive Machinery

Actin filaments are intrinsically polarized with fast-growing “barbed” ends and slow-growing “pointed” ends, and this inherent polarity is used to drive membrane protrusion.

However, the organization of filaments depends on the type of protrusion: In lamellipodia, actin filaments form a branching “dendritic” network, whereas in filopodia they are organized into long parallel bundles (6).

Actin polymerization in lamellipodia is mediated by the Arp2/3 complex, which binds to the sides or tip of a preexisting actin filament and induces the formation of a new daughter filament that branches off the mother filament (6, 7).

Activation of the Arp2/3 complex is localized by WASP/WAVE family members, which are themselves activated at the cell membrane (6) (see below).

Pushing of the membrane, the actual protrusive event, is believed to occur not by elongation of the actin filament per se but by an “elastic Brownian ratchet” mechanism, in which thermal energy bends the nascent short filaments, storing elastic energy. Unbending of an elongated filament against the leading edge would then provide the driving force for protrusion (7).

Several actin-binding proteins regulate the rate and organization of actin polymerization in protrusions by affecting the pool of available monomers and free ends (7, 8).

For example, profilin prevents self-nucleation by binding to actin monomers and also serves to selectively target monomers to barbed ends. Filament elongation is terminated by capping proteins, thereby restricting polymerization to new filaments close to the plasma membrane.

In addition, disassembly of older filaments, which is needed to generate actin monomers for polymerization at the front end, is assisted by proteins of the ADF/cofilin family, which sever filaments and promote actin dissociation from the pointed end. Other proteins play supporting roles in the dendritic network:

Cortactin stabilizes branches, whereas filamin A and -actinin stabilize the entire network by cross-linking filaments (6). Filopodial protrusion is thought to occur by a filament treadmilling mechanism, in which actin filaments within a bundle elongate at their barbed ends and release actin monomers from their pointed ends (6).

The long and unbranched filament organization is consistent with assembly occurring by elongation rather than by branched nucleation. Many proteins are enriched at filopodial tips, including Ena/VASP proteins, which bind barbed ends of actin filaments and antagonize both capping and branching, thereby allowing continuous elongation of filaments and fascin, which bundles actin filaments and might thereby generate the stiffness needed to allow efficient pushing of the plasma membrane in filopodia (6).

Fig. 1. The polarized cell. (A) PIP3: Leading-edge localization of a green fluorescent protein (GFP) fusion of the PH domain of Akt/PKB in chemotaxing Dictyostelium cells. (Micrograph by R. Meili and R. Firtel.) (B) Phosphorylated 4 integrin: Localization at the leading edge of phosphorylated 4 integrin expressed in migrating CHO cells. The localization was assayed by immunostaining with an antibody directed against the phosphorylated 4 integrin cytoplasmic domain. [Micrograph by L. E. Goldfinger and M. H. Ginsberg, reproduced from The Journal of Cell Biology, 2003, Vol. 162, p. 732, by copyright permission of The Rockefeller University Press] (C) PTEN: Localization of a GFP fusion of PTEN in chemotaxing Dictyostelium cells. PTEN is absent from the leading edge but present along the lateral sides and posterior of the cell. (Micrograph by R. Meili and R. Firtel.) (D) Activated Rac: Activated Rac localizes preferentially with an effector in the leading edge of migrating 3T3 cells. The interaction of GFP-V12Rac with an effector domain was assayed by fluorescence resonance energy transfer (FRET). The enhanced interaction in the leading edge is due to locally regulated membrane targeting of the V12Rac. Red and blue represent high and low intensities of FRET (that is, of interaction), respectively. (Micrograph by M. Del Pozo, W. B. Kiosses, and M. A. Schwartz.)

The supramolecular design of lamellipodia and filopodia endows them with the capacity to perform distinct functions. Biophysical considerations suggest that the dendritic organization of lamellipodia provides a tight brush-like structure that is able to push along a broad length of plasma membrane (7).

Through localized activation of the Arp2/3 complex, the lamellipodium could be induced to grow in a particular direction, providing the basis for directional migration. In contrast, filopodia, with their parallel bundle organization, are particularly well designed to serve as sensors and to explore the local environment, although they are not essential for chemotaxis.

Rho family proteins: Central regulators of protrusion. Rho family small guanosine triphosphate (GTP)–binding proteins (GTPases) are pivotal regulators of actin and adhesion organization and control the formation of lamellipodia and filopodia.

They are conformationally regulated by the binding of GTP and GDP: When bound to GTP, they are active and interact with their downstream target proteins, which include protein kinases, lipid-modifying enzymes, and activators of the Arp2/3 complex (9).

Rho GTPases are activated by guanine nucleotide exchange factors (GEFs) and inactivated by GTPase activating proteins (GAPs).

Of the Rho GTPases, Rac, Cdc42, and RhoG are required for protrusion of lamellipodia and filopodia. The major targets for Rac and Cdc42 that mediate actin polymerization in protrusions are the WASP/WAVE family of Arp2/3 complex activators.

Rac stimulates lamellipodial extension by activating WAVE proteins (10).

Cdc42 binds to WASP proteins, and in vitro this stimulates the Arp2/3 complex to induce dendritic actin polymerization (6).

However, this interaction may not account for Cdc42’s ability to induce filopodia, because cells lacking WASPs are still able to form filopodia (11); and, as described above, filopodia contain parallel actin filaments and not a dendritic network.

RhoG does not interact directly with WASPs but appears to act upstream of Rac by binding to and activating a Rac-GEF complex (12).

WAVE/WASP proteins may themselves regulate the activity of Rac and Cdc42 by binding to GAPs and GEFs (13–15), and could thereby generate positive or negative feedback loops to regulate the extent of Cdc42/Rac-induced actin polymerization.

WAVE/WASP proteins can also be regulated by other stimuli apart from Cdc42 and Rac, including Src family kinases, the adaptor proteins Nck and WIP, and phosphoinositides (7, 14, 16–19).

Polarizing the Cell: AKeystone of Migration

For a cell to migrate, it must be polarized, which means that the molecular processes at the front and the back of a moving cell are different.

Establishing and maintaining cell polarity in response to extracellular stimuli appear to be mediated by a set of interlinked positive feedback loops involving Rho family GTPases, phosphoinositide 3-kinases (PI3Ks), integrins, microtubules, and vesicular transport (Figs. 1 and 2).

Although the following discussion synthesizes information from multiple cell systems, the relative contributions of the various signals depend on the cell type and the specific stimulus.

Cdc42: A master regulator of cell polarity.

Cdc42 is a master regulator of cell polarity in eukaryotic organisms ranging from yeast to humans. Cdc42 is active toward the front of migrating cells (20), and both inhibition and global activation of Cdc42 can disrupt the directionality of migration (9).

One way in which Cdc42 influences polarity is by restricting where lamellipodia form (21) (see below). Cdc42 can also affect polarity by localizing the microtubule-organizing center (MTOC) and Golgi apparatus in front of the nucleus, oriented toward the leading edge.

Cdc42-induced MTOC orientation may contribute to polarized migration by facilitating microtubule growth into the lamella and microtubule-mediated delivery of Golgiderived vesicles to the leading edge, providing membrane and associated proteins needed for forward protrusion (9, 22).

Reorganization of the MTOC appears to be more important for the migration of slow-moving cells, because in fast-moving cells such as neutrophils and T cells, it is usually located behind the nucleus (23).

The effects of Cdc42 on MTOC position appear to be exerted mainly through a pathway involving the Cdc42 effector PAR6, which exists in a complex with PAR3 and an atypical protein kinase C (aPKC) (24).

The molecular mechanism by which the PAR6/ PAR3/aPKC complex orients the MTOC is incompletely understood, but recent evidence suggests that it could occur as a result of local capture of microtubules at the leading edge via APC, a protein that binds tubulin and localizes to the ends of microtubules (9), via CLIP170 and IQGAP (22) and/or via the microtubule-based dynein/dynactin motor protein complex (24).

A downstream target of Cdc42, the kinase PAK1, can itself mediate Cdc42 activation downstream of heterotrimeric GTP-binding protein (G protein)–coupled receptors, which are activated by many chemoattractants. These interactions define a positive feedback loop between Cdc42 and PAK1, resulting in high Cdc42 activity at the leading edge (25).

Other feedback loops involving integrins may also contribute to maintaining local Cdc42 activation (9, 26). PI3Ks and PTEN: The gradient amplifiers. A surprising aspect of chemotaxis is the ability of cells to respond directionally to very shallow chemoattractant gradients (less than a 10% difference in the concentration of chemoattractant between the front and rear of a cell) (27).

Such a small difference in signaling between the front and rear needs to be amplified into steeper intracellular signaling gradients in order to generate a cellular response.

The phosphoinositides PtdIns(3,4,5)P3 (PIP3) and PtdIns(3,4)P2 [PI(3,4)P2] are key signaling molecules that become rapidly and highly polarized in cells that are exposed to a gradient of chemoattractant (Fig. 2).

This amplification process involves both localized accumulation and activation of PI3Ks, which generate PIP3/PI(3,4)P2, and the phosphatase PTEN, which removes them.

In Dictyostelium, for example, PI3Ks rapidly accumulate at the leading edge of cells in response to a chemoattractant, whereas PTEN becomes restricted to the sides and the rear (27, 28) (Fig. 1).

Cells with altered PI3K or PTEN activity can usually migrate but exhibit a significantly reduced ability to move directionally up a chemoattractant gradient. Although it is not yet clear what regulates the localization of PI3Ks, Cdc42 activation is implicated in PTEN exclusion from protrusions in leukocytes, and PIP3 appears to be required for localizing Cdc42 activity (25).

These results imply that there is a network of positive feedback loops between Cdc42, PI3K products, and PTEN that work together to initiate and maintain the polarity of migrating cells, although a Cdc42 paralog has not yet been identified in Dictyostelium.

Localized Rac activation: Initiating and maintaining protrusion. How do Cdc42 and PI3Ks lead to activation of the actin polymerization machinery required for active protrusion?

The key event appears to be defining where Rac is active (Fig. 1). This is probably achieved by activating or delivering a Rac exchange factor locally, and indeed several Rac GEFs are activated by PI3K products (29).

Once Rac is active, several feedback loops have been identified that help maintain directional protrusion. First, Rac can itself stimulate the recruitment and/or activation of PI3Ks at the plasma membrane, which then act upstream of Rac by PIP3-sensitive Rac GEFs (21, 29).

Second, microtubules and Rac may form a positive feedback loop in which microtubule polymerization activates Rac, and Rac in turn stabilizes microtubules (22).

Third, integrin engagement leads to Rac activation and membrane targeting (30), and so new adhesions formed at the leading edge will stimulate Rac, which in turn induces recruitment and clustering of activated integrins to the edge of lamellipodia (31, 32). PIP3 also contributes to integrin activation (33) and may thereby further enhance the positive feedback to Rac.

Defining the tail. Is restriction of PIP3, active Cdc42, and Rac to the front of the cell sufficient to make the back of the cell follow the front? In several cell types, inhibition of Rho leads to the formation of an extended tail, possibly because actomyosin-based contractility in the body of the cell is decreased. Rho may also act in the tail by stabilizing microtubules, which would then promote focal adhesion turnover (see below) (22, 34).

One model for how migrating cells maintain polarity is based on the fact that Rho and Rac are mutually antagonistic, each suppressing the other’s activity (35).

Active Rac at the leading edge of cells would suppress Rho activity, whereas Rho would be more active at the sides and rear of the cell and suppress Rac activity, thereby preventing Racmediated protrusion at sites other than the leading edge (36, 37). However, active Rac has been implicated in detachment at the rear of migrating cells (38), and also Rho can lead to Rac activation (39).

Integrins and Adhesion in Migration For migration to occur, a protrusion must form and then stabilize by attaching to the surroundings. Although many different receptors are involved in the migration of different cell types, the integrins are a major family of migration-promoting receptors. These receptors act as the “feet” of a migrating cell by supporting adhesion to the ECM or other cells and by linking via adapters with actin filaments on the inside of the cell. As described above, integrins activate migration-related signaling molecules. They are also recipients of “insideFig.

2. Steps in cell migration. Polarity is intrinsic to a migrating cell (A).

Cdc42, along with Par proteins and aPKC, are involved in the generation of polarity. Several additional proteins are implicated in polarity, which results in directed vesicle trafficking toward the leading edge, organization of microtubules (in some cells), and the localization of the MTOC (in some cells) and Golgi apparatus in front of the nucleus. In the presence of a chemotactic agent, PIP3 is produced at the leading edge through the localized action of PI3K, which resides at the leading edge, and PTEN, a PIP3 phosphatase that resides at the cell margins and rear. PTEN and myosin II are implicated in restricting protrusions to the cell front. The migration cycle begins with the formation of a protrusion (B). WASP/ WAVE proteins are targets of Rac and Cdc42 and other signaling pathways and regulate the formation of actin branches on existing actin filaments by their action on the Arp2/3 complex.

Actin polymerization, in turn, is regulated by proteins that control the availability of activated actin monomers (profilin) and debranching and depolymerizing proteins (ADF/cofilin), as well as capping and severing proteins. Protrusions are stabilized by the formation of adhesions. This process requires integrin activation, clustering, and the recruitment of structural and signaling components to nascent adhesions. Integrins are activated by talin binding and through PKC-, Rap1-, and PI3K-mediated pathways. Integrin clustering results from binding to multivalent ligands and is regulated by Rac. At the cell rear, adhesions disassemble as the rear retracts (C). This process is mediated by several possibly related signaling pathways that include Src/FAK/ERK, Rho, myosin II, calcium, calcineurin, calpain, and the delivery of components by microtubules. Many of these molecules may also regulate the disassembly of adhesions at the cell front out signaling”; that is, activation to a highaffinity state by cytoplasmic signals (40).

The integrins are heterodimeric receptors consisting of  and chains with large ligand-binding extracellular domains and short cytoplasmic domains. The binding of ligands to the extracellular portion of integrins leads to conformational changes in the receptors by changing interactions between the - and -chain cytoplasmic domains (41) and to integrin clustering. This combination of occupancy and clustering initiates intracellular signals such as protein tyrosine phosphorylation, activation of small GTPases, and changes in phospholipid biosynthesis that regulate the formation and strengthening of adhesion sites, the organization and dynamics of the cytoskeleton, and cell polarity during migration (40).

Although integrins themselves do not have any catalytic activity, signals are transmitted through direct and indirect interactions with many partners of integrins.

Activated integrins preferentially localize to the leading edge, where new adhesions form (31).

Integrin affinity is regulated in large part by alterations in the conformation of the integrin extracellular domains that result from interactions at the integrin cytoplasmic tail (42).

Activation of key intermediates such as the GTPase Rap1 or PKC increase integrin affinity. Conversely, activation of Raf-1 kinase often suppresses integrin activation (43). The cytoskeletal linker protein talin promotes integrin activation by binding to a subset of integrin -subunit tails and disrupting integrin -–subunit tail interactions (42, 44).

The signaling potential of integrins can also be modified by posttranslational modifications of the cytoplasmic domains. For example, integrin 4 phosphorylation on serine blocks the binding of paxillin, a signaling adapter protein. In migrating cells, 4 phosphorylation at the leading edge (Fig. 1) and the consequent release of bound paxillin are required to maintain stable lamellipodia of cells migrating on ligands for integrin 41 (45).

Formation of adhesions.

The mechanism by which adhesions assemble in migrating cells is a major challenge that is only beginning to be addressed. Presumably it begins with small-scale clustering due to the multivalent nature of the ECM to which the cell is adhering. Some cells, particularly rapidly migrating ones such as leukocytes, have few visible integrin clusters, and thus very small submicroscopic adhesions are probably important for their migration.

In other cells, small adhesions known as focal complexes can be observed at the leading edge. Formation of these adhesions depends on Rac and Cdc42, and these adhesions stabilize the lamellipodium by mediating attachment to the ECM, thereby contributing to efficient migration. However, cells with large integrin clusters (“focal adhesions”) are tightly adherent and are typically either nonmigratory or move very slowly. The assembly of focal adhesions involves Rho as well as myosin-induced contractility.

During their formation, some protein components enter adhesions with similar kinetics, which suggests that they exist in preformed cytoplasmic complexes (46). However, other components enter adhesions with very distinct kinetics, which is consistent with a model in which a regulatory event initiates the serial addition of different proteins. Paxillin, for example, is present in nascent adhesions, whereas -actinin appears more prominently in “older” adhesions (46).

Tractional forces.

By connecting the ECM to the intracellular cytoskeleton, integrins serve as both traction sites over which the cell moves and as mechanosensors, transmitting information about the physical state of the ECM into the cell and altering cytoskeletal dynamics (3, 47, 48).

Because migrating cells must be able to detach, yet exert traction on the substratum, migration speed is a biphasic function of the strength of cell attachment.

The latter is determined by the density of adhesive ligands on the substrate, the density of adhesion receptors on the cells, and the affinity of the receptors for the adhesive ligands (3). Thus, shifts in any of these parameters can have a dramatic effect on migration.

The force transmitted to sites of adhesion derives from the interaction of myosin II with actin filaments that attach to these sites. Myosin II activity is regulated by myosin light-chain (MLC) phosphorylation, which is either directly positively regulated by MLC kinase (MLCK) or Rho kinase (ROCK) or negatively regulated by MLC phosphatase, which is itself phosphorylated and inhibited by ROCK.

Whereas MLCK is regulated by intracellular calcium concentration as well as by phosphorylation by a number of kinases, ROCK is regulated by binding Rho-GTP (49). MLC phosphorylation activates myosin, resulting in increased contractility and transmission of tension to sites of adhesion. In migrating cells, the strongest forces have been reported to be transmitted to the focal complexes at the leading edge and the retracting regions at the rear (47). In contrast, in more adhesive cells, force transmitted through a focal adhesion to the substratum is proportional to the adhesion’s cross-sectional area (50). It is striking that the tractional forces measured in many studies far exceed what should be needed for cell translocation. One explanation is that cells in tissue culture may be responding to a “wound” environment, which activates Rho and thus stimulates contractility. Because traction forces are unevenly distributed over migrating cells, integrin signaling is a means of reporting these force differences to the cell.

Adhesion disassembly at the front. Adhesion disassembly is observed both at the leading edge, where it accompanies the formation of new protrusions, and at the cell rear, where it promotes tail retraction. At the front of migrating cells, adhesions at the base of a protrusion disassemble as new adhesions form at the leading edge (46).

However, some adhesions persist and mature into larger, more stable structures. Little is known about adhesion disassembly versus maturation; however, targeting of microtubules has been implicated as one factor that promotes adhesion disassembly (34).

Both protein kinases and phosphatases also appear to be central to the regulation of adhesion turnover and stability (51).

For example, cells lacking the tyrosine kinases FAK or Src have more and larger adhesions and migrate poorly (46, 52).

The interaction of FAK with Src and the adapter proteins Cas and Crk, which in turn activate Rac-specific GEFs, appears to regulate adhesion turnover. Adhesion turnover in migrating cells is also regulated by a complex of Rac-associated proteins (53) and by the mitogen-activated protein kinase ERK (54).

The emerging evidence favors a model for adhesion turnover in which activation of the protein tyrosine kinases FAK and Src accompanies the formation of an adhesion signaling complex that in turn mediates the localized activation of Rac and ERK.

These signals then contribute to the turnover of adhesions at the leading edge. Adhesion disassembly and retraction at the rear.

At the rear of migrating cells, adhesions must also disassemble. In fibroblasts, the rearmost adhesions often tether the cell strongly to the substratum, resulting in a long tail to the site of anchorage. The tension can be sufficient to physically break the linkage between integrin and the actin cytoskeleton, with the result that integrin is left behind while the rest of the cell moves on; a similar behavior has been observed in vivo (3).

High tension exerted on the rear adhesions contributes to detachment (3). Several lines of evidence point to a role for myosin II in this event as well as in the maintenance of polarity.

Dictyostelium cells deficient in myosin II or its regulator PAKa show impaired retraction and the formation of multiple pseudopodia along the sides of the cell (55). A similar phenotype is seen in monocytes or neutrophils in which myosin II assembly is blocked through inhibition of Rho or Rho kinase (36, 37). AlR though this retraction contributes to the net movement of migrating cells, it may also contribute to polarity, because the release of adhesions at the cell rear is somehow coupled to increased protrusive activity at the front.

FAK, Src, and the other regulators of adhesion turnover at the front appear to work at the rear as well. In addition, intracellular calcium levels are implicated in the disassembly of adhesions at the rear. The tension generated in migrating cells by strong adhesions in the rear can be sufficient to open stretch-activated calcium channels (56). Potential targets for calcium are the calcium-regulated phosphatase calcineurin and the calcium-activated protease calpain, which is also activated by ERK and has the potential to cleave several focal adhesion proteins, including integrins, talin, vinculin, and FAK (57, 58).

A Molecular Model for Cell Migration

The information discussed above can be assembled into an emerging model for how cells polarize and migrate (Fig. 2). Cells migrate directionally in response to a variety of cues, including gradients of chemokines, growth factors, or ECM molecules.

These factors engage cell surface receptors, initiating a cascade of events, including the activation of G proteins or tyrosine kinases, the stimulation of GEFs for Cdc42, and the activation of lipid kinases and the subsequent recruitment of activated Rac.

The local activation of Rac and/or Cdc42, in concert with other regulators such as WASP/WAVE family proteins and the Arp2/3 complex, stimulates the formation of a branching actin filament network at the leading edge, which in turn induces a protrusion in the direction of migration.

The polymerization of actin is regulated by proteins that cap growing filaments, sever older portions of existing filaments, and control the availability of activated actin monomers. Localized activation of Cdc42 and Rac decreases Rho activity and enhances PI3K activity and the production of PI(3,4)P2/PIP3 at the leading edge. Cdc42 also contributes to cell polarization by mediating reorientation of the MTOC toward the cell front, leading to growth of microtubules and delivery of vesicles into this region. Integrins and other adhesion molecules are activated by PI3Ks, PKCs, and/or Rap via talin, and they stabilize the protrusion via structural connections to the actin filaments. They also signal to Rac, which promotes recruitment of additional integrins and the formation of adhesions.

New adhesions at the leading edge in turn reinforce high Rac, Cdc42, and PI3K activity, whereas the formation of a gradient of Rho activity that is low at the leading edge and higher at the rear and sides further constrains Rac activity to the front. Polarization is often accompanied by sensitization of receptors at the leading edge, thus favoring continued movement in the same direction.

Adhesions transmit propulsive forces and serve as traction points over which the cell moves. The migration cycle is completed as adhesions disassemble and the rear retracts. The disassembly of adhesions is controlled by pathways that include FAK, ERK, Src, and the protease calpain, as well as microtubule dynamics. Retraction at the rear requires Rho kinase and is a myosindependent process.

The release of adhesions at the rear and front appear to share some common mechanisms and are coupled to the formation of protrusions at the front. Moving Ahead in Migration Research into the molecular basis of cell migration has progressed rapidly over the past few years. Key regulatory molecules have been identified and the mechanisms of component processes elucidated, providing potential targets for therapeutic intervention in diseases involving cell migration.

However, there are still many unresolved issues regarding how cells establish and maintain their polarity, how adhesions form and disperse, how cells migrate in vivo, and how cells recognize their targets. In addition, we know little about how the spatially segregated component processes are integrated temporally and spatially across the cell.

This will require technologies that can recognize, quantify, and perturb localized signals, as well as methods to visualize and characterize the dynamics of localized events that are below the resolution of the light microscope. Other challenges include determining when and where important molecular complexes form and disperse, elucidating the structures of the supramolecular complexes that drive migration, accumulating quantitative data on molecular dynamics and concentrations, and developing models of the component processes and their integration. Ultimately, we will have to study these molecular details in cells migrating in vivo. Although some of these questions and challenges seem daunting at present, the future looks bright as imaging, structure, molecular, and transgenic technologies continue to improve.


(Fluierul)


Linkul direct catre Petitie

CEREM NATIONALIZAREA TUTUROR RESURSELOR NATURALE ALE ROMANIEI ! - Initiativa Legislativa care are nevoie de 500.000 de semnaturi - Semneaza si tu !

Comentarii:


Adauga Comentariu



Citiți și cele mai căutate articole de pe Fluierul:

Progresiștii își continuă planul AMESTECULUI ETNIC FORȚAT. Bilderbergul Emmanuel Macron spune că țările UE care refuză migranții ar trebui date afară din Schengen

Protestatarii #rezist l-au urmărit și apostrofat pe Valer Dorneanu, președintele CCR, până acasă - VIDEO

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

Liviu Pleşoianu, demască fățătnicia și minciunile individului numit Victor Ponta care MINTE așa cum RESPIRĂ! Victor Ponta pe rit vechi înainte de alegeri făcea pe naționalistul și conservatorul, "același" Ponta face azi pe soroșistul-progresist

Trădătorii nu se lasă până nu ne dau resursele naturale care sunt ale noastre 100%, ȘI MAI PE NIMIC.Klaus Iohannis și secretarul pentru Energie al SUA au discutat despre resursele de gaz din Marea Neagră. Oficialul american s-a întâlnit și cu Liviu Dragnea

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

PE 7 NOIEMBRIE MERGETI LA REFERENDUMUL PENTRU FAMILIE. E O DATORIE DE ONOARE FAȚĂ DE STRĂMOȘII NOȘTRI ȘI O DATORIE SFÂNTĂ FAȚĂ DE NEPOȚII ȘI STRĂNEPOȚII NOȘTRI NENĂSCUȚI

ORGIE în toaleta unui club din România. Totul a fost filmat cu un telefon mobil. VIDEO

Prezentatoare TV în sânii goi, după ce a fost trădată de rochie în direct VIDEO

UPDATE. UEDZI REVINE SI VREA SA TREACA PE PLUS. Pariuri sportive. Meciurile de AZI si ISTORICUL MECIURILOR din 15 septembrie 2018 alese și pariate de UEDZULA alintat UEDZI, programul de inteligență artificială al Fluierul.ro

SEX TAPE made in Romania: 4 vedete autohtone FILMATE făcând perversităţi VIDEO

Țara arde şi Iohannis se cațără. VIAȚĂ DE PREŞEDINTE FĂRĂ GRIJI. NESFÂRŞITELE VACANȚE ALE LUI KLAUS IOHANNIS. Klaus Iohannis a urcat pe Vârful Negoiu după vacanța de pe litoral la Neptun şi înainte să plece pe litoralul spaniol la Palma de Mallorca

MOSTENIREA nestiuta a lui Ceausescu! America e SOCATA de ce a descoperit in Romania
ULTIMA ORA: Dusmanii tarii vor sa ascunda adevarul

Analiza Gramaticala - Clasele V - VIII

O fostă majoretă a făcut SEX cu un elev de 15 ani! Filmul XXX a ajuns pe INTERNET. VIDEO

Cum fac SEX rusoaicele, nemţoaicele sau italiencele. Clipul care a făcut senzaţie pe net VIDEO

Simona Popescu - Cotidianul - România este condusă de Multinaționalele Străine prin două francize : "Președintele Prostănac" şi "Premierul Tehnocrat"

TOP 10 cele mai bune ACTRIŢE PORNO din istorie. Sau cum sunt manipulați tinerii de mici FOTO

Au făcut sex în restaurantul plin de oameni. Ce a făcut ospătăriţa când i-a văzut VIDEO XXX

Panama anunță că va retrage pavilionul acordat navei umanitare Aquarius 2

Cea mai nouă modalitate de a scăpa de amendă este propusă chiar de poliție

Horoscop SĂPTĂMÂNAL 24-30 septembrie 2018. Zile IMPREVIZIBILE cu Luna plină şi Pluto ieşind din retrograd! Ai CURAJ?

Jos pălăria! Declarația prin care Hagi i-a făcut pe olteni să se simtă mari

ECHINOCŢIUL DE TOAMNĂ. Tradiţii şi superstiţii. Ce trebuie să faci pe 23 septembrie

Cu toții o știm și o iubim pe FETIȚA ZURLI. CUM ARATĂ în realitate, cum o CHEAMĂ de fapt și ce VÂRSTĂ are | VIDEO

PROGNOZA METEO: Apare bruma, temperaturile scad, iar precipitaţiile sunt şi sub formă de lapoviţă şi ninsoare

Profit.ro: O firmă controlată de Gabriela Firea și fiul ei cel mare va primi 200.000 lei pentru un teren din Voluntari expropriat pentru autostradă

Accident rutier grav pe DN 67 Motru - Târgu Jiu

#Rezist a trolat festivalul iMapp, cu mesajul Jos PSD. Primăria Capitalei anunță plngere penală

Atacul de la parada militară iraniană: AmbasadoriiOlandei, Danemarcei și Marii Britanii, convocați de autoritățile de la Teheran

Român arestat în Italia cu o zi înaintea nunţii. Mirele le-a mulţumit carabinierilor că l-au scăpat de altar

HOROSCOP 24 SEPTEMBRIE 2018: O zodie stă bosumflată toată ziua. ce se întâmplă luni cu celelalte semne astrale

Iranul acuză SUA și Israelul, promițând o ripostă dură după atentatul soldat cu zeci de morți

TEHNOCRAȚII SOROȘIȘTI MAI DAU O LOVITURĂ ȚĂRII. CEC-ul va fi condus de străini printr-o selecție făcută de străini. Ministerul Finanțelor a semnat cu firma Transearch International contractul pentru selecția noii conduceri a CEC Bank

Fanii Craiovei lui Mititelu, deplasare tristă la Turnu Măgurele. Ce li s-a întâmplat la meciul contra echipei fiului lui Dragnea

Accident grav în Vrancea, o persoană a murit pe loc

Accident tragic: Două femei au murit într-un accident în care șoferul a adormit la volan

"Trebuie să facem în așa fel încât să nu mai spuneți asta". Ce a dorit să transmită Mangia după victoria cu Viitorul

Klaus Iohannis, vizită de o săptămână în Statele Unite ale Americii

Cele mai dese 10 minciuni ale femeilor, în cuplu

O navă comercială elvețiană a fost victima unui atac în largul apelor nigeriene, anunță Berna

[P] In IKEA Group, credem ca egalitatea de gen este responsibilitatea fiecaruia dintre noi

LOTO, LOTO 6 DIN 49. REZULTATE LOTO 23 SEPTEMBRIE 2018, numere loto 23.09.2018. Report uriaş la Categoria I

CAMERA ASCUNSĂ: Turişti filmaţi pe ascuns în momente de intimitate

#Rezist a trolat festivalul iMapp, cu mesajul "Jos PSD". Primăria Capitalei anunță plângere penală | FOTO

Ce impact au avut serviciile de CAR SHARING în România, de succes în occident. Ce spun cei care folosesc deja Uber, BlaBlaCar, Taxify sau Black Cab

Două săptămâni până la referendum. Opinie separată la CCR pe redefinirea familiei

Fotbal: Nicolae Stanciu a reușit o 'dublă' pentru Sparta Praga, în campionatul Cehiei

6 reguli de viaţă după care toţi oamenii ar trebui să trăiască

Corina Creţu, avertisment pentru Guvernul României. Ce decizie s-a luat la Bruxelles

Fotbalist celebru, prins cu amanta la piscină. Soţia a filmat imaginile intime şi le-a făcut publice VIDEO

Ora la care te-ai născut: Ai noroc sau ghinion? Ce spune Mihai Voropchievici

Marea Britanie: Laburiștii vor alegeri dacă prim-ministrul Theresa May nu obține sprijinul pentru acordul asupra Brexit

Ion Ţiriac dă lovitura, afacere de 6 milioane de euro cu premierul Ungariei, Viktor Orban

Prima reuniune după CExN-ul tensionat din PSD. Ședință, luni, în care vor participa și contestatarii lui Dragnea - surse

Emoții pentru evoluția Simonei Halep la turneul de la Wuhan din China. Românca a acuzat dureri de spate

Ion Țiriac, afacere pe bani foarte mulți cu premierul Ungariei. Lovitura pe care Viktor Orban vrea s-o dea în sportul mondial

A treia încercare a Statului Paralel Progresist de a prelua controlul în PSD. Balanța forțelor înainte de votul din CExN: 20 de filiale îl susțin pe Dragnea, iar 13 organizații îi cer demisia. Multe formațiuni județene sunt indecise

Fotbal - Liga I: Universitatea Craiova - FC Viitorul 2-0

Situație tensionată în Marea Britanie. Theresa May ar putea convoca alegeri anticipate din cauza Brexit /Opoziția ar vrea un nou referendum

Box: Anthony Joshua, învingător prin KO tehnic în meciul cu Aleksandr Povetkin

Accident cu victime în Vrancea. Un mort și trei răniți după impactul dintre o mașină și un camion, pe DN2

LOVITURA PENTRU TRIPLETA SOROS-OBAMA-HILLARY Statul Texas se retrage din programul SUA de primire a refugiaților

​VIDEO La Liga: Real Madrid, victorie la limită n fața lui Espanyol, scor 1-0 (Rezultatele etapei)

ANALIZA Ungaria și proiectul democrației iliberale

Seria fabuloasă a lui lui Naomi Osaka, la final! Japoneza nu a avut nicio șansă în finala de la Tokyo

Horoscop: 3 zodii cu mare noroc la sfârşit de septembrie. Vor avea câştiguri uriaşe

Horoscop zilnic DUMINICĂ 23 SEPTEMBRIE 2018. Intrăm în zodia Balanţei!

Când este bebeluşul pregătit pentru autodiversificare?

Atac devastator la adresa lui Bratu: "Când Nistor te-a făcut antrenor, era jucător?"

Simona Halep a făcut SENZAŢIE la WUHAN. Ţinuta FABULOASĂ cu care i-a uimit pem chinezi FOTO

ULTIMA ORĂ: Acum e oficial: Bratu, OUT de la Dinamo! Prima reacție a tânărului antrenor: "Asta regret"

Patriarhul Daniel, înainte de referendum: "Îndemnăm clerul şi credincioşii noştri să apere familia tradiţională"

PROGNOZĂ METEO specială pentru Bucureşti: ANM anunţă temperaturi scăzute şi ploi slabe

LIVE BLOG | Derby-urile care contează. Maratonul începe la 16:00, cu AIK Stockholm - Hammarby. Seara intră în scenă Răzvan Marin, Băluță, Gabi Enache și Lucescu Jr. Tragem cortina după Boca Juniors - River Plate

HOROSCOP 24-30 SEPTEMBRIE: Cum stai cu dragostea în ultima săptămână din septembrie

Locuri de VIS pe care puțină lume le știe. Unde poți pleca în vacanța

Cutremur cu magnitudine 6.4. Epicentrul seismului a fost la o adâncime de doar 10 kilometri

Aproape 30 de romni candidează la alegerile locale din Belgia pentru posturi de consilieri locali

Neymar primește o critică greu de dus. Antrenorul lui Fleetwood Town îl compară cu Kim Kardashian

Gardul liniei de tramvai din fața Spitalului pentru Copii, tăiatpentru a permite accesul ambulanțelor

MFP: Au fost depuse cereri de ajutoare de stat n valoare de 1,38 mld. lei, bugetul este de 614 mil. lei

HOROSCOP Mihai Voropchievici 24-30 septembrie 2018: o săptămână de alergătură, plină de nebuloase şi întorsături. Previziunile runelor

ANM: Atenționări de răcire a vremii și vânt puternic: Vor fi cu până la 10 grade mai puțin decât normalul - HARTA coduri galbene

Tenis: Kiki Bertens, învingătoare în turneul WTA de la Seul

Echinocţiu de toamnă 2018. Ce trebuie să ştii şi care este semnificaţia spirituală. Ce ritual să faci în ziua echinocţiului

Momentul fabulos al unui român la Europeanul de tenis de masă VIDEO | "Asta a fost arma mea!". Ovidiu Ionescu i-a învins la C.E. din Alicante pe campionul en-titre și pe titanul Samsonov, azi joacă pentru intrarea în finală

Patru beneficii ale consumului de miere

Echinocțiu de toamnă 2018. ncepe toamna astronomică. Ziua este egală cu noaptea

CALENDAR ŞCOLAR modificat. Şcoala se termină mai repede în Bucureşti din cauza CE 2020

Ace de cusut în căpşunele de la supermarket. Scandalul ia amploare internaţională

Momente dramatice pentru Laura Lavric. Casa părintească din Suceava a fost mistuită de flăcări

SONDAJ ALEGERI PREZIDENŢIALE 2019: Tăriceanu, mai bine clasat ca Dragnea, dar fără şanse în faţa lui Iohannis

VIDEO Laver Cup: Europa vs Restul Lumii 7-5, după a doua zi de competiție

O actriţă celebră din filmele pentru adulţi vrea să se mute în România. Mesajul, viral pe reţelele de socializare

LIVE BLOG | Double shot. Urmărim împreună două partide de foc la Europeanul de la Alicante. Bernie Szocs se ciocnește cu poloneza Li Qin, Ovidiu Ionescu dă piept cu legendarul Vladimir Samsonov. Pătrunderea în semifinale înseamnă bronz

Tenis de masă: Ovidiu Ionescu și-a asigurat o medalie la Europenele de la Alicante

Șapte soldați, uciși în nord-vestul Pakistanului

Circulație restricționată, duminică, în Capitală pentru "Turul României 2018"

Simona și-a mărit echipa, iar cel mai nou membru are doar 21 de ani. Cum o va ajuta pe Halep

Accident grav pe DN2, două fetei au murit în urma impactului

Zodiile la echinocţiul de toamnă. Ceva dulce şi ceva amăruri pentru fiecare

Filme porno şi orgii sexuale într-o instituţie publică din Timişoara

MIREASĂ prinsă de CAVALERUL de ONOARE în timp ce îşi înşela SOŢUL: Cine este BĂRBATUL ăsta? VIDEO

Dezvăluiri din şedinţa PSD: Dragnea, dezlănţuit la adresa lui Tăriceanu! Ce îi reproşează liderului ALDE

Eurovision 2019. Consiliul de Administraţie al TVR a aprobat participarea la concurs

9 mituri despre căderea părului la bărbaţi

Nigeria: Pirații au răpit 12 persoane de la bordul unei nave elvețiene

Bratu, anunțat târziu în noapte că nu mai e antrenorul lui Dinamo. Favoritul să-l înlocuiască + cine va conduce antrenamentele

Asensio, decisiv în lipsa lui Bale. Real, victorie la limită cu Espanyol și revenire pe primul loc

Tupeu de Slugă la Bilderbergi. "Pot să ți găsesc un job doar trecând strada", i-a spus președintele Franței Emmanuel Macron unui tânăr disperat aflat în căutarea unui job. Credeți că i-a găsit sau doar a dat din gură?

Zodiile care îţi otrăvesc viaţa. Care sunt cei mai TOXICI oameni din horoscop

IESITI DE PE SNAPCHAT. Snapchat, rețeaua care își autodistruge mesajele, începe să transmită publicitate

Horoscop ACVARIA 24 - 30 septembrie 2018. Trei zodii au o săptămână memorabilă. Previziuni complete

Vicepreședinte PNL: O consiliez pe Dăncilă, campioana gafelor. Propun cinci miniștri pentru remaniere

Două cărți de istorie, pentru Centenar, finanțate cu suma de 2,5 mil.lei de către Primăria Capitalei. Una dintre ele, SEMNATĂ de Ioan Aurel Pop, președintele Academiei Române

Jandarmii, huiduiți la meciul Iași - Dinamo după ce au cerut nlăturarea bannerelor Moldova vrea autostradă

INACO: România stagnează anul acesta în Raportul Global al Progresului Social, pe locul 44 în lume din 146 de țări

Cele mai bune filme erotice pe care le-ai ratat - Video

La spital cu toxiifecție alimentară severă, după ce au participat la o pomenire


Pag.1 Pag.2 Pag.3 Pag.4 Pag.5 Pag.6 Pag.7
Pag.8 Pag.9 Pag.10 Pag.11 Pag.12 Pag.13 Pag.14 Pag.15
Pag.16 Pag.17 Pag.18 Pag.19 Pag.20 Pag.21 Pag.22 Pag.23
Pag.24 Pag.25

Nr. de articole la aceasta sectiune: 2956, afisate in 25 pagini.