01:01
Comentarii Adauga Comentariu

Proteină G-fosforilarea receptorului cuplat: unde, când și de către cine



. 2008 Mar; 153 (Suppl 1): S167-S176.
Publicat online 2008 Jan 14. doi:  10.1038 / sj.bjp.0707662
PMCID: PMC2268057
PMID: 18193069

Proteină G-fosforilarea receptorului cuplat: unde, când și de către cine

Abstract

Aproape toți receptorii G-proteinei cuplați (GPCR) sunt reglați prin fosforilare și acest proces este un eveniment cheie în determinarea proprietăților de semnalizare ale acestei super-familii de receptori. Receptorii se multiplică fosforilați la locurile care pot apărea în regiunile intracelulare ale receptorului. Această diversitate a siturilor fosfo-acceptor împreună cu o lipsă de secvențe de fosforilare consecvente a condus la sugestia că locul exact al fosforilării nu este important în reglarea dependentă de fosforilare a funcției GPCR, ci mai degrabă creșterea Fața intracelulară a receptorului, care este factorul semnificativ. Această revizuire investighează posibilitatea ca caracterul multi-site al fosforilării GPCR să reflecte importanța evenimentelor specifice de fosforilare care mediază rezultatele distincte de semnalizare. În acest mod, fosforilarea receptorului poate asigura un mecanism de reglare flexibil care poate fi adaptat într-o manieră specifică țesutului pentru a regla procesele fiziologice. Prin înțelegerea naturii flexibile a fosforilării GPCR, dacă este posibil să se producă agoniști sau modulatori alosterici care promovează un subgrup al evenimentelor de fosforilare pe GPCR țintă și astfel se restrânge acțiunea medicamentului la un răspuns de semnalizare mediată de receptor.

Cuvinte cheie: Receptorul cuplat cu proteina G, fosforilarea, receptorul kinazei cuplate cu proteina G, cazeina kinaza, arrestina, internalizarea, desensibilizarea, GRK, Akt / PKB,

Introducere

S-a cunoscut de peste 20 de ani că receptorii cuplați în proteina G (GPCR) sunt reglați prin fosforilare ( ). De la început, a fost clar că pentru GPCR-urile non-vizuale, procesul de fosforilare a receptorului dependent de stimulare a fost mediat de mai mult de o familie de proteine ​​kinaze. Studii asupra β 2 adrenoceptor determinat că ambele protein kinaza A (PKA) ( ) și β-adrenoceptor kinazei ( ), care urma să fie redenumită receptorul kinazei 2 asociată cu proteina G (GRK2), ar putea media fosforilarea receptorilor. În această etapă timpurie a fost clar că aceste kinaze de proteine ​​diferite, activate de mecanisme distincte, au fost capabile să fosforileze diferite situsuri pe receptor și că acest lucru a dus la rezultate diferite de semnalizare ( ).

Pe parcursul anilor care au intervenit, totuși, multe dintre conceptele importante ilustrate în aceste studii timpurii au fost pierdute în încercarea de a genera o ipoteză unificatoare care să țină seama de reglarea funcției GPCR în întreaga superfamilie GPCR. Această căutare a mecanismelor de reglementare comune a dus la o înțelegere clară a rolului jucat de familia GRK și a arestărilor în procesele universale, cum ar fi desensibilizarea receptorilor și internalizarea acestora ( ). GPCR-urile sunt, totuși, o familie de proteine ​​remarcabil diversă și răspândită implicată în reglarea aproape a oricărui răspuns biologic ( , ). Același subtip de receptor este adesea exprimat pe țesuturi foarte diferite, unde reglementează răspunsurile fiziologice definite. Se pare probabil că GPCR-urile vor fi reglate diferențiat în diferitele țesuturi în care sunt exprimate și că acest lucru va fi în conformitate cu funcția specifică țesutului receptorului.

În această revizuire, vom lua în considerare posibilitatea ca fosforilarea receptorilor să fie mediată de o serie de receptori kinaze capabile să fosforileze situsuri distincte pe GPCRs. Această fosforilare specifică locului ar avea ca rezultat un rezultat specific de semnalizare. În acest mod, fosforilarea receptorului ar putea acționa ca un proces de reglare dinamic și flexibil, care ar putea fi adaptat într-o manieră specifică tipului celular.

Rolul fosforilării în interacțiunea GPCR cu arrestin

GPCR-urile funcționează în mod esențial ca proteine ​​dinamice de schelă care interacționează cu o serie de molecule de semnalizare într-o manieră care poate fi influențată de modificările conformaționale în receptorul indus de ocupația agonistă ( ; ; ). Publicarea structurilor cristaline anticipate acut ale β 2 adrenoceptor în complex cu un agonist invers ( ; ) oferă speranța că în viitorul apropiat va fi posibil un model structural definitiv al unui GPCR activ. În același timp, punctul de vedere al consensului este că legarea agonistului are ca rezultat o schimbare a pozițiilor relative ale a-helicelor transmembranare III și VI, ceea ce are ca rezultat o reorientare a celei de-a treia bucle intracelulare într-o manieră care permite cuplarea proteinei G ( ). Această modificare conformațională indusă de agonist se consideră, de asemenea, că descrește locurile pe domeniile intracelulare care pot fi modificate prin fosforilare ( ). Acest proces combinat de schimbare conformațională și modificare post-translațională permite receptorului să interacționeze cu proteine ​​care anterior nu au putut să interacționeze cu receptorul. În mod alternativ, modificarea conformațională a receptorului după legarea agonistului poate induce o schimbare conformatională în partenerii interacțioși care sunt prezenți într-un complex pre-asamblat cu receptorul și activând astfel proprietățile de semnalizare ale partenerilor. Între o listă crescândă de proteine ​​care interacționează cu GPCR ( , ), familia arrestină este cea mai extensivă studiată și reprezintă partenerul interactiv dependent de fosforilare arhetipală.

Sunt patru membri ai familiei arrestiene. Arrestin1 și arrestin4 sunt așa-numitele arrestine vizuale exprimate numai în fotoreceptori de tip tijă și conuri, unde interacțiunea cu rodsopina activată și fosforilarea opsonilor duce la terminarea fototransducției ( ). Celelalte două arestări, arrestin2 și arrestin3, sunt capabile să reglementeze activitatea celor mai multe sute de GPCR non-vizuale ( ). Studiile timpurii au stabilit că legarea arrestinului este un proces în două componente în care atît receptorul fosforilat, cît și conformația activată de ligand a receptorului au fost recunoscute de regiuni distincte pe molecula de arrestină ( ). Această legare cooperativă a servit la modificarea conformării moleculei arrestin la o stare "activă" cu o afinitate ridicată pentru receptor ( ). Studiile de modelare efectuate în primul rând de către grupul Gurevich au demonstrat că asocierea arrestinului cu situsuri multiple în regiunile intracelulare ale GPCR-urilor are ca rezultat un complex care în mod eficient "captează" GPCR și, prin urmare, exclude cuplarea proteinei G ( ). În acest fel, arrestinul este capabil să decupleze sau să desensibilizeze receptorul de la căile de semnalizare dependente de proteinele G ( ). De asemenea, a devenit clar faptul că, în plus față de interacțiunea cu proteina G care împiedică steric, arrestinele acționează de asemenea ca proteine ​​de schele pentru molecule cum ar fi src și componente ale cascadei protein kinazei activate de mitogen și prin această cale sunt capabile să activeze proteina G- semnalizarea independentă ( ; ).

Relația dintre fosforilarea receptorului și legarea arrestinelor pentru arrestinele vizuale este relativ clară. În acest caz, fosforilarea serinelor și a treoninelor conținute într-un grup din coada C-terminală a rohodopsinei ( , ) conduce la o creștere de 10 ori a afinității arrestinei pentru receptorul activat de lumină ). Senzorul de fosfat pe arrestin se află îngropat într-un miez polar și constă în principal dintr-o punte de sare între o arginină conservată (R175 în arrestin1) și un aspartat (D296) ( , ). Fosfații conținute pe situsurile receptorilor fosfo-acceptori sunt propuși a fi "ghidați" la miezul polar al arrestinului prin interacțiunea cu resturile de lizină pe suprafața concavă a moleculei de arrestin ( ). Întreruperea punții de sare la miezul polar împreună cu forța motrice derivată din interacțiunile multiple ale suprafeței concave a arrestinului cu conformația receptorului activat (așa-numitul senzor de activare) ( ) conduce la confecționarea ( ; ) ( Figura 1 ).

Un fișier extern care deține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este 0707662f1.jpg

Interacțiunea arrestinului cu receptorul cuplat cu proteină G activată și fosforilată. (1) Legarea agonistă a receptorului are ca rezultat o schimbare de conformație care afectează în special orientarea helicelor transmembranare III și VI. (2) Această schimbare conformațională este considerată ca având ca rezultat schimbări încă nedefinite în regiunile de buclă intracelulară și coada C-terminală care dezmembrează siturile de fosforilare și determină fosforilarea în mai multe situsuri (P). (3) Conformarea activă a receptorului este detectată de senzorul de activare pe arrestin. Senzorul de activare constă din mai multe situsuri de interacțiune situate pe suprafața concavă a moleculei de arrestin care sunt capabile să se angajeze cu conformația activă a receptorului. De asemenea, reziduurile fosforilate sunt arătate inițial interacționând cu resturile (lizinele) situate pe suprafața exterioară a moleculei de arrestină. (4) Arrestin se leagă cu afinitate ridicată la receptor și adoptă o conformație activă prin interacțiuni ulterioare cu receptorul activat prin intermediul senzorului de activare și prin interacțiunea cu fosfații cu senzorul de fosfat situat în miezul polar. Conformarea activă a arrestinului este propusă pentru a implica reorientarea celor două domenii ale arrestinului.

În timp ce rolul fosforilării rhodopsinei în recrutarea arrestinei este clar, acest lucru nu este cazul pentru GPCR-urile non-vizuale. Spre deosebire de sistemul vizual în care fosforilarea de rhodopsină crește în mod dramatic afinitatea receptorului activat pentru arrestin, fosforilarea GPCRs non-vizuale are doar un efect mic asupra afinității arrestinelor, adesea însemnând nu mai mult de o creștere de 2- până la 3 ori ( ). Această creștere modestă a afinității apare în ciuda faptului că trăsăturile esențiale ale mecanismului molecular al legării receptorului / arrestinului par să fie conservate între sistemele vizuale și cele non-vizuale. Astfel, arrestin2 și 3 se crede că fac contacte multiple cu receptorul ocupat de ligand prin reziduuri pe suprafața concavă a arrestinei care acționează ca senzor de activare. Aceasta funcționează în cooperare cu interacțiunea receptorilor fosfați la senzorul de fosfat situat la miezul polar ( ). Problema care se confruntă cu arrestin2 și 3 este că aceste două molecule sunt regulatoare ale subtipurilor de 600-800 GPCR care prezintă o omologie de secvență foarte mică în domeniile lor intracelulare și care sunt fosforilate la situsuri multiple din diferite regiuni receptor. Astfel, GPCRs s- au dovedit a fi fosforilate pe coadă C-terminală ( ; ; ), a treia bucla intracelulara ( ; ; ; ), prima buclă intracelulară ( ) și posibil pe a doua bucla intracelulară ( ). Fosforilarea receptorului poate fiasemeneamediată de diferite protein kinaze ( ; ), careîn unele cazuriau fost demonstratea promova legarea arrestin ( ; ; ;) și în altele nu au efect asupra interacțiunii arrestinilor ( ). Rezultatul acestei heterogenități este o gamă de afinități receptor-arrestină în care anumiți receptori, cum ar fi receptorul vasopresinei V2, au o afinitate suficient de mare pentru complexul de aristin-receptor să rămână intact în timpul traficului receptorului către compartimentele intracelulare după stimularea agonistă ). Astfel de receptori au fost clasificați ca receptori de clasă B ( ). Aceasta se compară cu receptorii de clasa A, cum ar fi β 2adrenoreceptori, care prezintă o afinitate relativ scăzută pentru arrestin și în care complexele receptor-arrestină sunt mult mai greu de vizualizat ( , ).

De asemenea, este clar că pentru anumiți receptori, fosforilarea nu este o cerință absolută pentru legarea arrestinelor. Acest lucru este observat pentru receptorii de substanțe P ( ), lutropin ( ) și leucotrienă B4 ( ), în care mutanții cu deficit de fosforilare mențin încă capacitatea de a interacționa cu arrestin . Mai mult, legarea arrestinului este menținută în mutanții receptorilor receptori-2 activați de protează ( al oxrexin-1 ( )) unde locurile de fosforilare presupuse au fost îndepărtate. Este posibil ca interacțiunile multiple ale receptorului cu senzorii de activare asupra arrestinului să fie suficiente pentru a permite un complex stabil în absența fosforilării. Această noțiune a fost extinsă pentru a sugera că fiecare interacțiune elementară dintre receptor și arrestin are afinitate scăzută în domeniul micromolar ( ; ; ). Legătura cooperativă a acestor interacțiuni elementare are ca rezultat interacțiunea globală cu afinitate ridicată a receptorului cu arrestin. În acest model, elementele interacțiunii arrestinice ar putea fi pierdute (adică interacțiunea dependentă de fosforilare) cu o pierdere consecutivă a afinității receptorului pentru arrestin. Cu toate acestea, reducerea afinității poate să nu fie suficientă pentru a preveni complet legarea arrestinelor ( ).

Legarea independentă a fosforilării anumitor receptori poate fi totuși explicată prin prezența reziduurilor încărcate negativ care acționează ca fosfo-mimetice. Un grup acid în coada terminală C a receptorului chemokin D6, care pare legat în mod constitutiv de arrestin, joacă un rol-cheie în interacțiunea ( ). Similar, un aspartat din a treia bucle intracelulare a receptorului de lutropină se presupune că interacționează cu senzorul de fosfat în arrestin ( ) și că această interacțiune conduce la internalizarea receptorului independent de fosforilare. Având în vedere diversitatea familiei supergenului GPCR, este probabil ca receptorii D6 și lutropină să nu fie singurele exemple de receptori care mediază legarea arrestinelor prin intermediul resturilor de aminoacizi încărcate.

Fosforilarea specifică locului contribuie la proprietățile specifice ale interacțiunii receptor-arrestin?

Este remarcabil faptul că legarea arrestin la forma fosforilată a GPCRs non-vizuale poate tolera natura diversă a fosforilării GPCR. Această flexibilitate în legarea arrestinului a determinat ipoteza că arrestinul poate interacționa cu sarcina negativă plasată la un număr de poziții diferite pe receptor. Sa sugerat că este vorba despre cantitatea de încărcare negativă introdusă prin fosforilare, mai degrabă decât cu poziția exactă sau cu locul de fosforilare, care este factorul important în recrutarea arterenului la receptor ( ). Astfel, legarea arrestinului necesită cel puțin două reziduuri fosforilate în imediata vecinătate ( ). Pozițiile fosfo-acceptorului pe GPCR apar foarte des la grupuri de serină / treonină în care mai mult de unul dintre reziduuri este fosforilat ( , , , ; ). Deoarece aceste situsuri de fosforilare apar în diferite domenii intracelulare (coada C-terminală, a treia, a doua și prima bucle intracelulare), sa speculat că este o încărcătură negativă "în vrac" care este mai degrabă importantă decât secvența specifică de aminoacizi a fosfo-acceptor ( ).

Se pare însă că nu toate evenimentele de fosforilare sunt egale. Primul indiciu al acestei fost că fosforilarea β 2 adrenoceptor la PKA / protein kinaza C (PKC) , site - ul în porțiunea distală a treia bucla intracelulara și situsul PKA în regiunea proximală a cozii C-terminală ( ; ; ) nu au condus la recrutarea de arrestin ( ). În contrast, fosforilarea mediată de GRK la legarea arrestin mediată de coada terminală C-terminală. Deși ambele fosforilarea prin GRKs și rezultatele PKA / PKC în β 2- desensibilizarea adrenoceptorilor mecanismele folosite de aceste receptori kinaze sunt distincte ( ; ; ).

Mai recent, studiile asupra angiotensinei AT 1A receptorilor și V2 vasopresinei au demonstrat că GRK2 este protein kinaza în principal responsabilă pentru fosforilarea receptorului și recrutarea arrestin în celule HEK293 transfectate ( ; ; ). Acești receptori stimulează un răspuns binazic al protein kinazei regulat extracelulare (ERK) unde răspunsul maxim maxim este dependent de cuplarea proteinei G și răspunsul prelungit este mediat de recrutarea arrestinului ( , ; ). În acest caz, s-ar putea anticipa că întreruperea fosforilării receptorilor mediate de GRK2 și recrutarea arrestinelor ar perturba faza prelungită a activității ERK. În mod surprinzător, inhibarea activității GRK2 de către siARN a avut un efect redus asupra activității ERK mediată de receptorii AT 1A și V 2 ( , ). În contrast, inhibarea GRK-5 și 6, în ciuda faptului că nu a avut efect detectabil asupra fosforilării receptorilor, a redus recrutarea arrestinilor cu 30-50% și a inhibat faza prelungită (dependentă de arrestene) a răspunsului ERK ( ; ). Alte procese mediate de arrestene, cum ar fi internalizarea receptorului și desensibilizarea, au fost totuși atribuite fosforilării mediate de GRK2 și nu a activității GRK5 / 6 ( , ). O posibilă interpretare a acestor date este că GRK2 fosforilează AT 1A și receptorii V2 la site - uri diferite de cele fosforilate de GRK5 / 6. Ca urmare, sa sugerat că arrestin legat la receptorul fosforilata de GRK2 ar putea adopta o conformație care este diferită de cea adoptată atunci când arrestin este legat la receptorul fosforilata de GRK5 / 6 ( ; ). În cazul receptorilor AT 1A și V2, conformația arrestinică adoptată ca răspuns la fosforilarea GRK2 ar fi importantă pentru decuplarea proteinei G și cea adoptată după fosforilarea GRK5 / 6 ar fi importantă în cuplarea receptorului la calea ERK ( , , ).

Experimente suplimentare privind β 2 adrenoceptor au demonstrat că recrutarea în sine arrestin poate fi dependentă de izotipul GRK implicat în fosforilarea receptorului. Îndepărtarea individuală a siRNA a GRK2, 3, 5 și 6 a avut efecte diferențiale asupra cineticii recrutării arterezinei la receptor ( ). Acest lucru ar putea fi interpretat ca GRK-urile care mediază fosforilarea diferențială a receptorului și acest lucru, la rândul său, afectează rate diferite de recrutare de tip arrestin. O notă de avertizare sondată de către autorii acestor experimente constă în faptul că în prezent nu există dovezi din celulele intacte că diferiții membri ai familiei GRK pot difuza diferiți receptorii ( ; ; ).

Dovezi suplimentare că site - ul specific pe care un receptor este fosforilat este capabil sa medieze rezultate specifice de semnalizare a reieșit din studiile privind M 2 receptorul -muscarinic. În acest caz, mutația serinelor / treoninelor în alanine în două regiuni ale celei de-a treia buclă intracelulară cunoscută sub denumirea de clustere N- și C a împiedicat fosforilarea, internalizarea și desensibilizarea receptorului dependent de agonist ( ). Locurile de fosforilare preferate sunt la grupul C unde fosforilarea mediază interacțiunea receptorului cu arrestin ( ). Îndepărtarea grupului C împiedică asocierea arrestinului sălbatic cu M 2, dar, în mod surprinzător, a împiedicat, de asemenea, interacțiunea cu arrestin-R169E ( ) mutant arrestin independent de fosforilare . Acest construct de arrestină, care este mutat în senzorul de fosfat, este constitutiv activ, adoptând o conformație care mimie cea a arrestinului fosfat ( ). Eliminarea unei regiuni 16 de amino-acid în M 2 receptorul -muscarinic, care a inclus în centrul său C-cluster -ul , restaurat capacitatea M 2 receptorul -muscarinic pentru a interacționa cu ambele de tip sălbatic arrestin și arrestin-R169E ( ). Aceste rezultate au indicat că departe de grupul C care conține site-uri de fosforilare care au permis receptorului să interacționeze cu senzorul de fosfat în arrestin într-un mod convențional, cluster-ul C a fost mai degrabă în centrul unei regiuni care acționa ca o frână asupra arrestinului legare. Fosforilarea clusterului C a eliberat frâna și a permis receptorului să interacționeze cu arrestina. Aceasta a fost prima demonstrație a unui astfel de mecanism de frânare care pare să funcționeze într-un număr de alte tipuri de receptori, inclusiv receptorii de opioid ( ) și receptorii folitropinei ( ).

Se pare, așadar, că locurile precise de fosforilare pe oricare dintre subtipurile de receptori particulari pot fi importante în interacțiunea receptorului cu arrestin. Prin urmare, deși se poate considera că încărcarea negativă în vrac poate contribui la legarea arrestinului, este foarte probabil ca, cel puțin pentru anumiți receptori, contextul aminoacid în care are loc fosforilarea să fie important în dictarea rolului fosforilării în reglarea proprietățile de semnalizare ale receptorului.

Reglementarea semnalizarea asociată cu fosforilarea specifică a β amplasamentului 2 adrenoceptor

Se pare că desensibilizarea răspunsului adenilatciclaza mediat de β 2 adrenoceptor implică atât decupleze din proteine Gs și , de asemenea , a crescut degradarea AMP ciclic. Una dintre multitudinea de parteneri de legare la arrestin sunt izotipurile fosfodiesterazelor responsabile pentru hidroliza AMP ciclic ( ). Recrutarea fosfodiesterazelor la receptorul activat asigură o buclă de feedback negativ, ale cărei componente sunt asamblate la locul activității adenilat ciclazei stimulată de agonist. Acest proces de reglementare a fost recent legat de controversat (vezi ; ) Propunerea ca β 2 adrenoceptor este capabil de a comuta între Gs- și semnalizarea Gi-proteină prin fosforilare situs specifică mediată de PKA ( ). Astfel, se pare că fosforilarea poate avea un rol complex de reglementare în β 2 adrenoceptor adenilatciclaza de semnalizare. Fosforilarea mediată de GRK a β 2 adrenoceptor permite recrutarea de arrestin care decuplează receptorul din proteine Gs și recrutează fosfodiesteraza care îmbunătățește degradarea AMP ciclic. Această buclă de feedback negativ funcționează într - un mod aparent simultan cu fosforilarea mediată de PKA a p 2- adrenoreceptor care decuplează receptorul de proteina Gs (într-o manieră diferită de desensibilizarea mediată de GRK) și comută semnalizarea la proteinele Gi ( ).

Un exemplu al unui eveniment specific de fosforilare mediată de GRK rezultând în reglarea semnalului a fost raportată pentru GRK5 în interacțiunea Na + / H + -exchanger factor EBP50 de reglementare cu β 2 adrenoceptor. Domeniul PDZ de EBP50 interacționează cu coada C-terminală a β 2 adrenoceptor și această interacțiune este importantă în sortarea intracelular al receptorului următor internalizare stimulate de agonist ( ; ). Un element esențial în interacțiune este serinul 411 în coada terminalului C al receptorului, în cazul în care mutația la o alanină sau la aspartatul de fosfomimetic rezidă la perturbarea interacțiunii cu EBP50 ( ). Acest reziduu (serin 411) este cunoscut a fi fosforilat în mod specific de GRK5 in vitro ( ) și, prin urmare, sa sugerat că fosforilarea mediată de GRK5 a serinei 411 reglează interacțiunea EBP50 cu receptorul și acest lucru reglementează sortarea și reciclarea receptorilor. Un avertisment la această concluzie este că , ulterior in vivo analiza situsurile de fosforilare mediate de agonist asupra p 2-adrenoceptorul nu a stabilit serinul 411 ca situs GRK în celulele intacte ( ; ).

Natură multiplă a fosforilării GPCR

Mutagenesis ( ; ; ; ; ; ; , ), spectrometrie de masă ( , , ), hărți fosfo-peptidice ; ; ; ) și studiile de anticorpi ( ) pe o gamă largă de tipuri de receptori au demonstrat că GPCRs sunt multipli fosforilați. Studiile timpurii asupra rohodopsinei au demonstrat că această fosforilare este secvențială sau ierarhică ( ). Există acum un număr tot mai mare de dovezi care indică faptul că acest lucru este valabil și pentru GPCR-urile non-vizuale. Receptorul C5a de peptidă N-formil chemokină este fosforilat în starea bazală de către o proteină kinază necunoscută ( ), care pare să receptorul pentru fosforilarea indusă de ligand, care poate ( ) sau nu ( ) să se desfășoare prin intermediul GRK-urilor. Situl primar pentru fosforilarea dependentă de agonist al receptorului opioid-S este Ser363 pe coada C-terminală. Mutația acestei serine la alanină a împiedicat fosforilarea dependentă de ligand la alte situsuri de pe coada terminală C ( ). In vitro , fosforilare a treia bucla intracelulara a M 3- receptorul muscarinic de către proteina kinaza CK2 a arătat că mutația unui situs consens CK2 a dus la pierderea unui număr de evenimente de fosforilare, sugerând că această kinază mediază fosforilarea ierarhică multiplă ( ). Un studiu elegant al bradikininei B 2 receptorilor a arătat că fosforilarea bazala la Ser346 pe coada C-terminală este urmată de multiple phosphorylations care au fost atât timpul , cât și concentrația ligandului dependent. Acest model complex de fosforilare se datorează kinazelor multiple care sunt utilizate în fosforilarea acestui receptor, care includ GRK, PKC și cel puțin o proteină kinază neidentificată ( ).

Implicarea mai multor proteine ​​kinaze în fosforilarea GPCR

Fosforilarea în mai multe situsuri a GPCR-urilor reflectă probabil acțiunea unui număr de familii de proteine ​​kinaze ( Figura 2 ). Deși rolul PKA / PKC și GRK în fosforilarea GPCR a fost cunoscut timp de două decenii, dovezile că alte familii de protein kinaze sunt implicate au fost lentă să apară. Probabil cel mai clar exemplu este faptul că receptorii kinazici, alții decât PKA / PKC și GRK-urile au un rol în fosforilarea GPCR, a fost descoperirea faptului că unele GPCR-uri sunt fosforilate tirozină ( , ). În special, descoperirea că p 2-adrenoceptorul fosforilat pe tirozină a demonstrat importanța investigării reglementării GPCR în contextul celular corect.

Un fișier extern care deține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este 0707662f2.jpg

Rezumat al protein kinazelor cunoscute pentru fosforilarea receptorilor cuplați cu proteină G (GPCRs). Sunt prezentate proteine ​​kinazele care s-au demonstrat că fosforilează GPCR-urile și principalele consecințe funcționale ale evenimentului de fosforilare.

Metabolismul glucozei este controlat în principal de insulina care stimulează sinteza glicogenului, absorbția glucozei și depozitarea lipidelor, în timp ce adrenalina contracarează aceste acțiuni prin promovarea defalcării glicogenului, gluconeogenezei și lipolizei ( ; ). Acțiunile insulinei sunt potențate de capacitatea receptorului insulinei de a stimula fosforilarea tirozinei și interiorizarea β 2 adrenoceptor ( ; ). Studiile ulterioare au stabilit un mecanism complex prin care activarea receptorului de insulină a kinazei PI-3 conduce activitatea Akt / PKB (protein kinaza B), care a fost capabilă să fosforileze direct β2- adrenoreceptor la serinele 345/346 pe coada C-terminală ( ). Capacitatea lui Akt / PKB de a fosforila receptorul a fost obligatorie pentru fosforilarea tirozinei 350 mediată de insulină ( ). Acest proces de fosforilare ierarhică combinată a fost esențială în interiorizarea β 2 adrenoceptor. Faptul că siturile Akt / PKB de fosforilare pe β 2 adrenoceptor sunt diferite de cele ale siturilor GRK ( ; ) a sugerat că mecanismul de internalizare a receptorului este diferit de cel mediat de GRK. Această viziune a fost susținută de faptul că internalizarea receptorilor mediată de insulină și mediată prin intermediul GRK-urilor a arătat sensibilități diferite față de agenții care perturbă rețelele citoscheletice celulare ( ). Un mecanism propus a fost acela că fosforilarea tirozinei 350 creează un motiv de SH2 (domeniu de omologie de tip 2) ( ) care este capabil să promoveze asocierea c-Src, Grb2 și ( , , ). Crearea unui domeniu SH2 pare să acționeze în concert cu fosfurarea Akt / PKB pentru a media medierea receptorului ca răspuns la insulină ( ). O propunere interesantă , care vine din studiul de reglementare a insulinei a β 2 adrenoceptor este faptul că prin fosforilare situs - specifică a receptorului de către un număr de protein kinaze receptorului poate accesa în primul rând , mecanisme unice de internalizare și de reciclare, dar , de asemenea , prin crearea a unui motiv de interacțiune cu proteine, care în acest caz este un domeniu SH2 tirozin-fosforilat, receptorul acționează ca o proteină schele capabilă să semnaleze căi cum ar fi calea protein kinazei activată de mitogen în absența ligandului său propriu ( ). Astfel , într - un context fiziologic, insulina poate în mod eficient contra regla β 2 adrenoceptor semnalizarea prin internalizare a receptorului și , de asemenea , este capabil de a spori propriul potențial de semnalizare prin recrutarea β 2 adrenoceptor ca o proteina schele care augments activitatea ERK mediată de insulină.

Implicarea Akt / PKB în GPCRs fosforilare direct nu este limitată la β 2 adrenoceptor. Insulina ca factor de crestere-I a fost propus pentru a stimula Akt / fosforilarea mediată de PKB a β 1 adrenoceptori la serina 412 și mediază acest antagonism funcțional al β 1 adrenoceptori ( ). În plus, constatarea că a1A- adrenoceptorul este desensibilizat după fosforilarea de către Akt / PKB (Garcia-Sainz, 2005) și că migrarea celulelor stimulată de sphingosin-1-fosfat este reglată de S1P1 mediată de Akt / PKB (EDG-1) fosforilarea receptorului ( ) a evidențiat importanța acestei serine / treonin kinaze în reglarea unui număr de GPCRs.

Dovezi recente au arătat rolul familiei casein kinazei în fosforilarea GPCR. Studiile asupra receptorilor factorului de împerechere a drojdiei înfloritoare Saccharomyces cerevisiae au demonstrat un rol esențial pentru CK1 în fosforilarea serinelor în coada C-terminală. Aceste evenimente de fosforilare determină mono-ubiquitinizarea reziduurilor de lizină în aval de situsurile de fosforilare și acest lucru, la rândul său, mediază internalizarea receptorului ( ; ; ; ). Propriile noastre studii pe M 3receptorilor -muscarinic au demonstrat prin utilizarea de teste pe celule libere și un mutant-CK1α dominant negativ care CK1α era responsabilă, cel puțin parțial, pentru fosforilarea stimulată de agonist al M 1 - ( ; ) și M 3 receptorii -muscarinic ( ; ). În cazul M 3 receptorul -muscarinic, acest eveniment fosforilare a aparut pentru a reglementa capacitatea receptorului de a cupla la ERK-1/2 cale ( ).

Prima indicație că proteina kinaza CK2 ar putea fi implicată în fosforilarea GPCR a provenit din studiile asupra receptorului hormonului eliberator al tireotropinei în care mutația situsurilor CK2 ale protein kinazei în coada C-terminală a determinat o scădere a fosforilării receptorului și o pierdere a concentrației de arrestin- mediată de internalizare ( ). În acest caz, s-a constatat că cel puțin trei situri într-un grup strâns (T365, T371 și S383) au fost necesare pentru a fi fosforilate pentru a permite internalizarea receptorului dependente de arrestin. În mod special, internalizarea mediată de mutantul independent de fosforilare, arrestin-R169E, nu a fost afectat de eliminarea acestor situsuri de fosforilare. Astfel, în cazul receptorului hormonului de eliberare a tireotropinei, CK2 pare să înlocuiască GRK-urile în stimularea fosforilării receptorilor unei regiuni care a fost implicată în activarea arrestinelor și internalizarea receptorului ( ).

Studiile noastre privind M 3 receptorul -muscarinic au demonstrat că inhibarea CK2 protein kinazei prin agenți knockdown sau farmacologice siRNA ar putea reduce parțial fosforilarea receptorului mediat de agonist ( ). Hărțile fosfo-peptidice au arătat că CK2 ar fi probabil să fosforileze doar o submulțime de situsuri fosfo-acceptoare în a treia bucle intracelulare a receptorului ( ). Astfel, proteina kinaza CK2 poate fi adăugată la o listă în creștere a protein kinazelor, care include GRK2 / 6 ( , ) și CK1a ( ; ), care sunt cunoscute pentru a fosforila M 3 receptorului -muscarinic într - un mod dependent de agonist. Interesant este faptul că fosforilarea mediată de protein kinaza CK2 nu pare să conducă la internalizarea receptorului și la reglarea căilor ERK-1/2 ( ). Mai degrabă, inhibarea CK2 a determinat cuplarea sporită a receptorului pe calea kinazei JUN ( ). Aceste date combinate au sugerat că proteina kinaza CK2 fosforila o submulțime de situsuri fosfo-acceptor și că acestea au fost implicate în reglarea specifică a receptorului de cuplare la calea kinazei JUN și nu sunt implicate în alte procese dependente de fosforilare cum ar fi internalizarea receptorului și activarea ERK.

Concluzii și perspective

Există acum un corp colectiv de dovezi care indică faptul că fosforilarea GPCR este un proces complex care implică o gamă de diferite kinaze de proteine ​​capabile să fosforileze același receptor la diferite situsuri și că aceasta are ca rezultat rezultate diferențiate de semnalizare (vezi figura 2 ). În acest sens, fosforilarea GPCR prezintă un proces de reglementare flexibil în care recrutarea diferitelor proteine ​​kinaze în tipurile de celule ar putea adapta răspunsul de semnalizare al receptorului pentru a se potrivi unui rol fiziologic particular. Dacă acest lucru ar fi adevărat, atunci s-ar aștepta să se vadă diferite modele de fosforilare a receptorilor în diferite tipuri de celule. Că acest lucru poate fi cazul a reieșit din studiile de cartare fosfo-peptide care au produs o „ semnătură fosforilare “ a M 3- receptorul muscarinic exprimat în celule ovariene de hamster chinezesc (CHO) și neuroni granulari cerebella ( ) ( Figura 3 ). Aceste hărți au determinat faptul că unele evenimente de fosforilare, marcate ca numere în Figura 3 , sunt conservate între cele două tipuri de celule, în timp ce altele marcate cu săgeți sunt exclusive fie la celulele CHO, fie la neuronii granule cerebeloase ( ). Întrebarea din aceste studii este dacă evenimentele comune de fosforilare reglează funcțiile comune ale receptorilor, cum ar fi internalizarea receptorilor și fosforilațiile specifice sunt asociate cu semnalizarea specifică tipului de celule. La această întrebare este probabil să se răspundă numai în studiul receptorilor din mediul experimental provocator al tipurilor de celule native.

Un fișier extern care conține o imagine, o ilustrație etc. Numele obiectului este 0707662f3.jpg

M 3 receptori -muscarinic exprimați în celule ovariene de hamster chinezesc (CHO) și neuronii granulari cerebeloase sunt fosforilate diferentiat. Cerebral granule neuronii au fost cultivate de șoareci neonatali de șase zile și au fost menținute timp de 6 zile înainte de a fi marcate pentru studii de fosforilare. Celulele CHO care exprimă recombinant de șoarece M 3 receptor -muscarinic sau neuronilor granulari cerebeloase au fost marcate cu [ 32 P] ortofosfat timp de 1-2 h (100-200 pCi ml -1 ). Celulele au fost apoi stimulate timp de 5 minute cu agonistul muscarinic metacolină (100 uM ). Celulele au fost apoi solubilizate și M 3- receptorul muscarinic imunoprecipitat folosind un anticorp specific receptorului. Imunoprecipitarea a fost rezolvată prin SDS-PAGE de 8% și banda radioactivă asociată cu receptorul a fost excizată. Banda de receptor a fost apoi digerată cu tripsină și peptidele rezultate s-au separat în prima dimensiune prin electroforeză și în a doua dimensiune prin cromatografie în strat subțire. Poziția fosfo-peptidelor radioactive a fost apoi determinată într-un fosfoimager. Peptidele numerotate sunt cele care rulează în aceeași poziție și reprezintă situsuri de fosforilare care sunt aceleași în cele două tipuri de celule. Săgețile reprezintă evenimente de fosforilare care sunt specifice celulei în care receptorul este exprimat. Experimentul prezentat a fost adaptat de la unde pot fi obținute detalii ale metodelor.

Acest lucru se poate dovedi a fi un punct foarte important în ceea ce privește descoperirea și proiectarea de droguri. GPCR-urile acționează în mod clar într-o manieră specifică țesutului. În prezent, puțină atenție este acordată faptului că, prin identificarea proceselor specifice țesutului și prin orientarea acestora în strategiile terapeutice, putem limita efectele secundare comune pentru multe medicamente GPCR. Fosforilarea ar putea fi unul dintre fenomenele specifice țesuturilor care vor permite proiectarea mai specifică a medicamentelor. Prin generarea de agoniști sau de modulatori alosterici care vor promova un subset dat de evenimente de fosforilare asupra țintei, compușii GPCR farmaceutici pot fi făcuți specifici anumitor căi de semnalizare (o formă de trafic agonist) sau specifice subtipului GPCR țintă atunci când sunt exprimate numai într-o singură țesut.

Recunoasteri

Mulțumesc încrederea pentru sprijinul acordat (Grant 047600).

Glosar

Akt / PKBproteina kinază B
CHOOvarul de hamster chinezesc
ERKproteina kinază reglată extracelular
GPCRReceptorul cuplat cu proteina G
GRKReceptor kinază cuplată de proteină G
PKAprotein kinaza A
PKCprotein kinaza C

Note de subsol

Conflictul de interese

Autorii nu afirmă nici un conflict de interese.

Referințe

  • Baillie GS, Sood A, McPhee I, Gall I, Perry SJ, Lefkowitz RJ, și colab. Recrutarea fosfodiesterazei mediată de beta-arrestină mediată de PDE4 reglează trecerea beta-adrenoceptorului de la G la Gi. Proc Natl Acad Sci SUA. 2003; 100 : 940-945. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Benovic JL, Kuhn H, Weyand I, Codina J, Caron MG, Lefkowitz RJ. Desensibilizarea funcțională a receptorului beta-adrenergic izolat de către receptorul beta-adrenergic kinază: rolul potențial al unui analog al arrestinului proteic retinian (proteina 48-kDa) Proc Natl Acad Sci USA. 1987; 84 : 8879-8882. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Benovic JL, Pike LJ, Cerione RA, Staniszewski C, Yoshimasa T, Codina J, și colab. Fosforilarea receptorului beta-adrenergic la mamifere de proteina kinază dependentă de AMP ciclic. Reglarea ratei de fosforilare și defosforilare a receptorului prin ocuparea agonistului și efectele asupra cuplării receptorului la proteina de reglare a nucleotidului guaninei stimulatoare. J Biol Chem. 1985; 260 : 7094-7101. [ PubMed ]
  • Benovic JL, Strasser RH, Caron MG, Lefkowitz RJ. Bina-receptor adrenergic kinază: identificarea unei noi proteine ​​kinaze care fosforilează forma ocupată de agonist a receptorului. Proc Natl Acad Sci SUA. 1986; 83 : 2797-2801. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Blaukat A, Pizard A, Breit A, Wernstedt C, Alhenc-Gelas F, Muller-Esterl W, și colab. Determinarea receptorilor de bradykinină B2 in vitro a situsurilor de fosforilare și rolul lor în funcția receptorului. J Biol Chem. 2001; 276 : 40431-40440. [ PubMed ]
  • Bockaert J, Roussignol G, Becamel C, Gavarini S, Joubert L, Dumuis A, și colab. Proteinele care interacționează cu GPCR (GIPs): natura și funcțiile. Biochem Soc Trans. 2004; 32 Partea 5: 851-855. [ PubMed ]
  • Bouvier M, Hausdorff WP, De Blasi A, O'Dowd BF, Kobilka BK, Caron MG, și colab. Eliminarea siturilor de fosforilare din receptorul beta 2-adrenergic întârzie declanșarea desensibilizării promovate de agonist. Natură. 1988; 333 : 370-373. [ PubMed ]
  • Braun L, Christophe T, Boulay F. Fosforilarea reziduurilor serice principale este necesară pentru internalizarea receptorului de anafiltrat de complement 5a (C5a) printr-o cale dependentă de beta-arrestină, dinamină și clathrin. J Biol Chem. 2003; 278 : 4277-4285. [ PubMed ]
  • Budd DC, Willars GB, McDonald JE, Tobin AB. Fosforilarea receptorului m3-muscarinic cuplat la Gq / 11 este implicat în activarea receptorului a căii protein kinazei activate mitogen ERK-1/2. J Biol Chem. 2001; 276 : 4581-4587. [ PubMed ]
  • Cao TT, Deacon HW, Reczek D, Bretscher A, von Zastrow M. O interacțiune de domeniu PDZ-controlată de kinază controlează sortarea endocitică a receptorului beta2-adrenergic. Natură. 1999; 401 : 286-290. [ PubMed ]
  • Cen B, Xiong Y, Ma L, Pei G. Interacțiunea directă și diferențiată a beta-arrestinelor cu domeniile intracelulare ale diferiților receptori opioizi. Mol Pharmacol. 2001; 59 : 758-764. [ PubMed ]
  • Cherezov V, Rosenbaum DM, Hanson MA, Rasmussen SG, Thian FS, Kobilka TS, et al. De înaltă rezoluție structura cristalină a unui om prin inginerie β 2 receptor adrenergic cuplat cu proteina G. Ştiinţă. 2007; 318 : 1258-1265. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Daaka Y, Luttrell LM, Lefkowitz RJ. Schimbarea cuplării receptorului beta2-adrenergic la diferite proteine ​​G de proteina kinază A. Natură. 1997; 390 : 88-91. [ PubMed ]
  • Doronin S, Shumay E, Wang HY, Malbon CC. Akt mediază sechestrarea receptorului beta (2) -adrenergic ca răspuns la insulină. J Biol Chem. 2002; 277 : 15124-15131. [ PubMed ]
  • Eason MG, Moreira SP, Liggett SB. Patru serine consecutive în a treia buclă intracelulară sunt situsurile pentru fosforilarea și dezagregarea mediată de receptorii beta-adrenergici ai kinazei receptorului alfa-2-adrenergic. J Biol Chem. 1995; 270 : 4681-4688. [ PubMed ]
  • Fan G, Shumay E, Malbon CC, tirozin kinaza Wang H. c-Src leagă receptorul beta2-adrenergic prin intermediul fosfo-Tyr-350, fosforilează receptorul kinazei 2 al proteinei G și mediază desensibilizarea receptorului indusă de agonist. J Biol Chem. 2001; 276 : 13240-13247. [ PubMed ]
  • Feng Y, Davis NG. Akr1p și casein kinazele de tip I acționează înainte de etapa de ubiquitinizare a endocitozei de drojdie: Akr1p este necesară pentru localizarea kinazei la membrana plasmatică. Mol Cell Biol. 2000; 20 : 5350-5359. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Ferguson SS. Evoluția conceptelor în endocitoza receptorului G cuplat cu proteine: rolul în desensibilizarea și semnalizarea receptorului. Pharmacol Rev. 2001; 53 : 1-24. [ PubMed ]
  • Fredericks ZL, Pitcher JA, Lefkowitz RJ. Identificarea situsurilor de fosforilare a receptorilor kinazei receptori kinazei G în receptorul uman beta2-adrenergic. J Biol Chem. 1996; 271 : 13796-13803. [ PubMed ]
  • Friedman J, Babu B, Clark RB. Receptorul Beta (2) -adrenergic, lipsit de situsurile de consens de proteine ​​kinazice dependente de AMP ciclic, activează kinaza 1/2 reglată de semnal extracelular în celulele 293 ale rinichiului embrionic uman: lipsa dovezii pentru comutarea G (s) / G (i). Mol Pharmacol. 2002; 62 : 1094-1102. [ PubMed ]
  • Galliera E, Jala VR, Trent JO, Bonecchi R, Signorelli P, Lefkowitz RJ, și colab. Intervenția constitutivă dependentă de beta-arrestină dependentă de receptorul D6 al chemokinei umoroase umane. J Biol Chem. 2004; 279 : 25590-25597. [ PubMed ]
  • Gavi S, Shumay E, Wang HY, Malbon CC. Receptori cuplați cu proteină G și tirozin kinaze: intersecții în semnalizarea și reglarea celulară. Tendințe Endocrinol Metab. 2006; 17 : 48-54. [ PubMed ]
  • Giannini E, Brouchon L, Boulay F. Identificarea situsurilor majore de fosforilare în receptorul anafilatoxin uman C5a in vivo . J Biol Chem. 1995; 270 : 19166-19172. [ PubMed ]
  • Guo J, Wu Y, Zhang W, Zhao J, Devi LA, Pei G, și colab. Identificarea siturilor de fosforilare ale receptorului kinazei 2 asociate proteinei G responsabile de fosforilarea receptorilor de delta-opioid stimulată de agonist. Mol Pharmacol. 2000; 58 : 1050-1056. [ PubMed ]
  • Gurevich VV, Benovic JL. Interacțiunea arrestinică vizuală cu rodopsina. Legarea multisite secvențială asigură selectivitate strictă față de Rhodopsin fosforilat activat de lumină. J Biol Chem. 1993; 268 : 11628-11638. [ PubMed ]
  • Gurevich VV, Dion SB, Onorato JJ, Ptasienski J, Kim CM, Sterne-Marr R, și colab. Interacțiuni cu arrestin cu receptori cuplați cu proteină G. Studii de legare directă a arrestinelor de tip sălbatic și mutante cu receptori colinergici de rodopsin, beta2-adrenergici și m2 muscarinici. J Biol Chem. 1995; 270 : 720-731. [ PubMed ]
  • Gurevich VV, Gurevich EV. Baza structurală a reglării mediate de arrestin a receptorilor cuplați cu proteină G. Pharmacol Ther. 2006; 110 : 465-502. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Hall RA, Ostedgaard LS, Premont RT, Blitzer JT, Rahman N, Welsh MJ, și colab. Un motiv C-terminal găsit în receptorul beta2-adrenergic, receptorul P2Y1 și regulatorul de conductanță transmembranar de fibroză chistică determină legarea la familia de factori de reglare a schimbătorului Na + / H + a proteinelor PDZ. Proc Natl Acad Sci SUA. 1998; 95 : 8496-8501. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Hanyaloglu AC, Vrecl M, Kroeger KM, Miles LE, Qian H, Thomas WG și colab. Locurile de casein kinază II din domeniul C-terminal intracelular al receptorului hormonului eliberator al tireotropinei și receptorii hormonului eliberator de gonadotropină himeră contribuie la internalizarea dependentă de beta-arrestină. J Biol Chem. 2001; 276 : 18066-18074. [ PubMed ]
  • Hausdorff WP, Bouvier M, O'Dowd BF, Irons GP, Caron MG, Lefkowitz RJ. Locurile de fosforilare pe două domenii ale receptorului beta2-adrenergic sunt implicate în căi distincte de desensibilizare a receptorilor. J Biol Chem. 1989; 264 : 12657-12665. [ PubMed ]
  • Hicke L, Zanolari B, Riezman H. Fosforilarea cozii citoplasmatice a receptorului factorului alfa este necesară pentru ubiquitinizarea și internalizarea acestuia. J Cell Biol. 1998; 141 : 349-358. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Hirsch JA, Schubert C, Gurevich VV, Sigler PB. Structura cristalului 2.8 Å de arrestin vizual: un model pentru reglementarea arrestinului. Cell. 1999; 97 : 257-269. [ PubMed ]
  • Jala VR, Shao WH, Haribabu B. Translocarea beta-arrestin independentă de fosforilare și internalizarea receptorilor de leucotrienă B4. J Biol Chem. 2005; 280 : 4880-4887. [ PubMed ]
  • Karoor V, Malbon CC. Factorul de creștere a receptorului-1 de tip insulină stimulează fosforilarea receptorului beta2-adrenergic in vivo pe site-uri distincte de cele fosforilate ca răspuns la insulină. J Biol Chem. 1996; 271 : 29347-29352. [ PubMed ]
  • Karoor V, Wang L, Wang HY, Malbon CC. Insulina stimulează sechestrarea receptorilor beta-adrenergici și asocierea îmbunătățită a receptorilor beta-adrenergici cu Grb2 prin intermediul tirozinei 350. J Biol Chem. 1998; 273 : 33035-33041. [ PubMed ]
  • Kim J, Ahn S, Ren XR, Whalen EJ, Reiter E, Wei H, și colab. Antagonismul funcțional al diferitelor receptori kinazici cuplați în proteina G pentru semnalizarea receptorului angiotensinei II mediată de beta-arrestină. Proc Natl Acad Sci SUA. 2005; 102 : 1442-1447. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Kim KM, Valenzano KJ, Robinson SR, Yao WD, Barak LS, Caron MG. Reglarea diferențială a receptorilor dopaminergici D2 și D3 de către receptorii kinazei receptorului G și beta-arrestinelor cuplați cu proteine ​​G. J Biol Chem. 2001; 276 : 37409-37414. [ PubMed ]
  • Kishi H, Krishnamurthy H, Galet C, Bhaskaran RS, Ascoli M. Identificarea unei secvențe liniare scurte prezente în coada terminală C a receptorului de folitropină de șobolan care modulează legarea arrestin-3 într-o manieră independentă de fosforilare. J Biol Chem. 2002; 277 : 21939-21946. [ PubMed ]
  • Kobilka BK. Modificări conformaționale induse de agonist în receptorul beta2 adrenergic. J Pept Res. 2002; 60 : 317-321. [ PubMed ]
  • Kouhen OM, Wang G, Solberg J, Erickson LJ, Legea PY, Loh HH. Fosforilarea ierarhică a receptorului delta-opioid reglează dezagregarea și internalizarea receptorului indus de agonist. J Biol Chem. 2000; 275 : 36659-36664. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Kovoor A, Celver J, Abdryashitov RI, Chavkin C, Gurevich VV. Construcția specifică a mutanților beta-arrestin independenți de fosforilare, cu activitate constitutivă în celule. J Biol Chem. 1999; 274 : 6831-6834. [ PubMed ]
  • Krasel C, Bunemann M, Lorenz K, Lohse MJ. Legarea beta-arrestin la receptorul beta2-adrenergic necesită atât fosforilarea receptorului, cât și activarea receptorului. J Biol Chem. 2005; 280 : 9528-9535. [ PubMed ]
  • Kreienkamp HJ. Organizarea complexelor de semnalizare a receptorilor cuplați cu proteine ​​G, prin proteine ​​scheletice. Curr Opin Pharmacol. 2002; 2 : 581-586. [ PubMed ]
  • Kristiansen K. Mecanisme moleculare ale legării ligandului, semnalizării și reglării în superfamilia receptorilor cuplați cu proteină G: abordări de modelare moleculară și mutageneză la structura și funcția receptorului. Pharmacol Ther. 2004; 103 : 21-80. [ PubMed ]
  • Krupnick JG, Benovic JL. Rolul receptorilor kinazelor și al arrestinelor în reglarea receptorului G cuplat cu proteine. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 1998; 38 : 289-319. [ PubMed ]
  • Lee KB, Ptasienski JA, Bunemann M, Hosey MM. Aminoacizii aminoacizi care învecinează situsurile de fosforilare în receptorul muscarinic M2 reglează fosforilarea receptorului, internalizarea și interacțiunea cu arrestinele. J Biol Chem. 2000a; 275 : 35767-35777. [ PubMed ]
  • Lee KB, Ptasienski JA, Pals-Rylaarsdam R, Gurevich VV, Hosey MM. Legarea arrestinului la receptorul muscarinic de acetilcolină M (2) este exclusă de un element inhibitor în a treia bucle intracelulare a receptorului. J Biol Chem. 2000b; 275 : 9284-9289. [ PubMed ]
  • Lee MJ, Thangada S, Paik JH, Sapkota GP, Ancellin N, Chae SS, și colab. Fosforilarea mediată de Akt a receptorului EDG-1 cuplat cu proteina G este necesară pentru chemotaxia celulelor endoteliale. Mol Cell. 2001; 8 : 693-704. [ PubMed ]
  • Lefkowitz RJ. Receptorii cuplați cu proteină G. III. Noi roluri pentru receptorii kinazei și beta-arrestinelor în semnalizarea receptorului și desensibilizarea. J Biol Chem. 1998; 273 : 18677-18680. [ PubMed ]
  • Lefkowitz RJ. Analiza istorică: un scurt istoric și o retrospectivă personală a receptorilor transmembranari cu șapte celule. Trends Pharmacol Sci. 2004; 25 : 413-422. [ PubMed ]
  • Lefkowitz RJ, Pierce KL, Luttrell LM. Dancing cu diferiți parteneri: protein kinaza și fosforilarea a șapte receptori care se întind pe membrană reglează specificitatea de cuplare a proteinei G. Mol Pharmacol. 2002; 62 : 971-974. [ PubMed ]
  • Lefkowitz RJ, Shenoy SK. Transducția semnalelor receptorilor de către beta-arrestine. Ştiinţă. 2005; 308 : 512-517. [ PubMed ]
  • Lefkowitz RJ, Whalen EJ. Beta-arrestini: polițiști de trafic de semnalizare celulară. Curr Opin Cell Biol. 2004; 16 : 162-168. [ PubMed ]
  • Liu P, Roush ED, Bruno J, Osawa S, Weiss ER. Legarea directă a arrestinului vizual la o fosfopeptidă sintetică terminală carboxil de rodopsină. Mol Vis. 2004; 10 : 712-719. [ PubMed ]
  • Lohse MJ. Mecanisme moleculare ale desensibilizării receptorilor de membrană. Biochim Biophys Acta. 1993; 1179 : 171-188. [ PubMed ]
  • Lohse MJ, Andexinger S, Pitcher J, Trukawinski S, Codina J, Faure JP, și colab. Receptorul-desensibilizare specifică cu proteine ​​purificate. Dependența de kinază și specificitatea receptorului beta-arrestin și arrestin în sistemele receptorilor beta 2-adrenergici și rohodopsin. J Biol Chem. 1992; 267 : 8558-8564. [ PubMed ]
  • Luttrell LM, Lefkowitz RJ. Rolul beta-arrestinelor în terminarea și transducția semnalelor receptorilor cuplați cu proteină G. J Cell Sci. 2002; 115 Partea 3: 455-465. [ PubMed ]
  • Malecz N, Bambino T, Bencsik M, Nissenson RA. Identificarea siturilor de fosforilare în receptorul cuplat cu proteina G pentru hormonul paratiroidian. Fosforilarea receptorului nu este necesară pentru internalizarea indusă de agonist. Mol Endocrinol. 1998; 12 : 1846-1856. [ PubMed ]
  • Maudsley S, Martin B, Luttrell LM. Originile diversității și specificității în semnalizarea receptorului cuplat cu proteine ​​G. J. Pharmacol Exp Ther. 2005; 314 : 485-494. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Mendez A, Burns ME, Roca A, Lem J, Wu LW, Simon MI, și colab. Deactivarea rapidă și reproductibilă a rodopsinei necesită site-uri multiple de fosforilare. Neuron. 2000; 28 : 153-164. [ PubMed ]
  • Milasta S, Evans NA, Ormiston L, Wilson S, Lefkowitz RJ, Milligan G. Durabilitatea interacțiunilor dintre receptorul de orexin-1 și beta-arrestin-2 este definită de un grup unic de hidroxi-aminoacizi C-terminal și modulează cinetica regulării ERK MAPK. Biochem J. 2005; 387 Partea 3: 573-584. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Mildez MD, Christophe T, Rabiet MJ, Tardif M, Boulay F. Supraexpresia formelor de GRAC2 și GRK6 inactivă și catalitic inactive nu modifică fosforilarea indusă de agonist a receptorului C5a (CD88): dovezi că GRK6 este autofosforilat în Celulele COS-7. Biochem Biophys Res Commun. 1999; 259 : 224-229. [ PubMed ]
  • Milligan G, White JH. Interacțiuni proteine-proteine ​​la receptorii cuplați cu proteină G. Trends Pharmacol Sci. 2001; 22 : 513-518. [ PubMed ]
  • Mofett S, Adam L, Bonin H, Loisel TP, Bouvier M, Mouillac B. Cisteina 341 palmitoilată modulează fosforilarea receptorului beta2-adrenergic de către protein kinaza dependentă de cAMP. J Biol Chem. 1996; 271 : 21490-21497. [ PubMed ]
  • Mou L, Gates A, Mosser VA, Tobin A, Jackson DA. Hipoxia tranzitorie induce sechestrarea receptorilor muscarinici de acetilcolină M1 și M2. J Neurochem. 2006; 96 : 510-519. [ PubMed ]
  • Mukherjee S, Gurevich VV, Preninger A, Hamm HE, Bader MF, Fazleabas AT, și colab. Acidul aspartic 564 în a treia buclei citoplasmatice a receptorului hormon luteinizant / choriogonadotropinei este crucial pentru interacțiunea independentă cu fosforilarea cu arrestin2. J Biol Chem. 2002; 277 : 17916-17927. [ PubMed ]
  • Nakamura K, Hipkin RW, Ascoli M. Fosforilarea indusă de agonist a hărților receptorului de folitropină de șobolan în prima și a treia bucle intracelulare. Mol Endocrinol. 1998; 12 : 580-591. [ PubMed ]
  • Oakley RH, Laporte SA, Holt JA, Barak LS, Caron MG. Asocierea beta-arrestinei cu receptori cuplați în proteina G în timpul endocitozelor mediate de clathrin dictează profilul de resensibilizare a receptorilor. J Biol Chem. 1999; 274 : 32248-32257. [ PubMed ]
  • Oakley RH, Laporte SA, Holt JA, Caron MG, Barak LS. Afinitățile diferențiate ale arrestinului vizual, beta-arrestinei1 și beta-arrestin2 pentru receptorii cuplați cu proteină G delimitează două clase majore de receptori. J Biol Chem. 2000; 275 : 17201-17210. [ PubMed ]
  • Ohguro H, Palczewski K, Ericsson LH, Walsh KA, Johnson RS. Fosforilarea secvențială a rodopsinei la situsuri multiple. Biochimie. 1993; 32 : 5718-5724. [ PubMed ]
  • Ohguro H, Rudnicka-Nawrot M, Buczylko J, Zhao X, Taylor JA, Walsh KA, și colab. Aspecte structurale și enzimatice ale fosforilării de rodopsină. J Biol Chem. 1996; 271 : 5215-5224. [ PubMed ]
  • Oppermann M, Diverse-Pierluissi M, Drazner MH, Dyer SL, Freedman NJ, Peppel KC, și colab. Anticorpii monoclonali dezvăluie specificitatea receptorului în rândul receptorilor kinazei cuplați cu proteină G. Proc Natl Acad Sci SUA. 1996; 93 : 7649-7654. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Ozcelebi F, Miller LJ. Cartografia fosfopeptidică a receptorilor de colecistokinină asupra celulelor acinare pancreatice native stimulate de agonist. J Biol Chem. 1995; 270 : 3435-3441. [ PubMed ]
  • Pals-Rylaarsdam R, Hosey MM. Două domenii de fosforilare omoloage contribuie diferențiat la desensibilizarea și internalizarea receptorului mucarinic de acetilcolină m2. J Biol Chem. 1997; 272 : 14152-14158. [ PubMed ]
  • Panek HR, Stepp JD, Engle HM, Marks KM, Tan PK, Lemmon SK, și colab. Suppressorii deficienței cazein kinazei 1 de drojdie codificată de YCK definesc cele patru subunități ale unui nou complex clatrin AP-like. EMBO J. 1997; 16 : 4194-4204. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Papac DI, Oatis JE, Jr, Crouch RK, Knapp DR. Identificarea prin spectrometrie de masă a siturilor de fosforilare în rodopsina bovină albită. Biochimie. 1993; 32 : 5930-5934. [ PubMed ]
  • Paxton WG, Marrero MB, Klein JD, Delafontaine P, Berk BC, Bernstein KE. Receptorul AT1 al angiotensinei II este tirozină și serină fosforilată și poate servi drept substrat pentru familia de tirozin kinaze src. Biochem Biophys Res Commun. 1994; 200 : 260-267. [ PubMed ]
  • Perry SJ, Baillie GS, Kohout TA, McPhee I, Magiera MM, Ang KL, și colab. Direcționarea degradării ciclului AMP la receptorii beta 2-adrenergici de către beta-arrestine. Ştiinţă. 2002; 298 : 834-836. [ PubMed ]
  • Pitcher JA, Freedman NJ, Lefkowitz RJ. Receptor kinazele cuplate de proteine ​​G. Annu Rev Biochem. 1998; 67 : 653-692. [ PubMed ]
  • Prossnitz ER, Kim CM, Benovic JL, Ye RD. Fosforilarea terminalului carboxil al receptorului de peptid N- formil de către receptorul kinază cuplată cu proteina G, GRK2. J Biol Chem. 1995; 270 : 1130-1137. [ PubMed ]
  • Rasmussen SG, Choi HJ, Rosenbaum DM, Kobilka TS, Thian FS, Edwards PC, și colab. Structura cristalină a omului β 2 receptorilor cuplați cu proteina-G - adrenergici. Natură. 2007; 450 : 383-387. [ PubMed ]
  • Ren XR, Reiter E, Ahn S, Kim J, Chen W, Lefkowitz RJ. Diferitele kinaze de receptor cuplate la proteinele G guvernează semnalizarea mediată de proteina G și de beta-arrestină a receptorului vasopresinei V2. Proc Natl Acad Sci SUA. 2005; 102 : 1448-1453. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Richardson MD, Balius AM, Yamaguchi K, Freilich ER, Barak LS, Kwatra MM. Receptorul de substanță umană P care nu are domeniul C-terminal rămâne competent să desensibilizeze și să se internalizeze. J Neurochem. 2003; 84 : 854-863. [ PubMed ]
  • Roth AF, Davis NG. Ubiquitinizarea semnalului de endocitoză asemănător PEST al receptorului factorului a-factor de drojdie. J Biol Chem. 2000; 275 : 8143-8153. [ PubMed ]
  • Roth NS, Campbell PT, Caron MG, Lefkowitz RJ, Lohse MJ. Ratele comparative ale desensibilizării receptorilor beta-adrenergici de kinaza receptorilor beta-adrenergici și proteina kinază dependentă de AMP ciclică. Proc Natl Acad Sci SUA. 1991; 88 : 6201-6204. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Saltiel AR, Kahn CR. Inscripția insulinei și reglarea metabolismului glucozei și lipidelor. Natură. 2001; 414 : 799-806. [ PubMed ]
  • Seibold A, Williams B, Huang ZF, Friedman J, Moore RH, Knoll BJ și colab. Localizarea situsurilor care mediază desensibilizarea receptorului beta (2) -adrenergic prin calea GRK. Mol Pharmacol. 2000; 58 : 1162-1173. [ PubMed ]
  • Shumay E, Gavi S, Wang HY, Malbon CC. Traficul de receptori beta2-adrenergici: insulina și beta-agoniștii reglează internalizarea prin căi citoscheletale distincte. J Cell Sci. 2004; 117 Partea 4: 593-600. [ PubMed ]
  • Smith RD, Hunyady L, Olivares-Reyes JA, Mihalik B, Jayadev S, Catt KJ. Agonistul indus de fosforilare a receptorului AT1a al angiotensinei este localizat într-o regiune bogată în serină / treonină a cozii sale citoplasmatice. Mol Pharmacol. 1998; 54 : 935-941. [ PubMed ]
  • Stalheim L, Ding Y, Gullapalli A, Paing MM, Wolfe BL, Morris DR și colab. Funcții independente multiple ale arrestinelor în reglarea semnalizării și traficului de receptori-2 activat de protează. Mol Pharmacol. 2005; 67 : 78-87. [ PubMed ]
  • Tobin AB, Totty NF, Sterlin AE, Nahorski SR. Stimularea dependentă de fosforilarea receptorilor cuplați de proteina G de către cazein kinaza 1alpha. J Biol Chem. 1997; 272 : 20844-20849. [ PubMed ]
  • Torrecilla I, Spragg EJ, Poulin B, McWilliams PJ, Mistry SC, Blaukat A, și colab. Fosforilarea și reglarea receptorului cuplat cu proteina G de proteina kinaza CK2. J Cell Biol. 2007; 177 : 127-137. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Tran TM, Friedman J, Qunaibi E, Baameur F, Moore RH, Clark RB. Caracterizarea stimulării agoniste a proteinei kinazei dependente de cAMP și a fosforilării receptorului kinazei cuplate cu proteina G a receptorului beta2-adrenergic utilizând anticorpi specifici fosforerinei. Mol Pharmacol. 2004; 65 : 196-206. [ PubMed ]
  • Trester-Zedlitz M, Burlingame A, Kobilka B, von Zastrow M. Analiza spectrometrică de masă a efectelor agoniste asupra modificărilor posttranslaționale ale adrenoceptorului beta-2 în celulele de mamifere. Biochimie. 2005; 44 : 6133-6143. [ PubMed ]
  • Vioara JD, Ren XR, Lefkowitz RJ. Specia receptor-kinazică legată de proteina G pentru recrutarea beta-arrestinelor la receptorul beta2-adrenergic, revelată prin transferul de energie prin rezonanță fluorescentă. J Biol Chem. 2006; 281 : 20577-20588. [ PubMed ]
  • Vishnivetskiy SA, Hirsch JA, Velez MG, Gurevich YV, Gurevich VV. Tranziția arrestinului în starea activă de legare a receptorului necesită o balama interdomaină extinsă. J Biol Chem. 2002; 277 : 43961-43967. [ PubMed ]
  • Vishnivetskiy SA, Hosey MM, Benovic JL, Gurevich VV. Maparea interfeței arrestin-receptor. Elemente structurale responsabile de specificitatea receptorilor proteinelor de arrestină. J Biol Chem. 2004; 279 : 1262-1268. [ PubMed ]
  • Vishnivetskiy SA, Paz CL, Schubert C, Hirsch JA, Sigler PB, Gurevich VV. Cum reacționează arrestinul la starea fosforilată a rodopsinei. J Biol Chem. 1999; 274 : 11451-11454. [ PubMed ]
  • Wang H, Doronin S, Malbon CC. Activarea insulinei a protein kinazelor activate de mitogen Erk1,2 este amplificată prin expresia receptorilor beta-adrenergici și necesită integritatea Tyr350 a receptorului. J Biol Chem. 2000; 275 : 36086-36093. [ PubMed ]
  • Waugh MG, Challiss RA, Berstein G, Nahorski SR, Tobin AB. Desensibilizarea indus de agonist și fosforilarea receptorilor m1-muscarinici. Biochem J. 1999; 338 Partea 1: 175-183. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Wei H, Ahn S, Shenoy SK, Karnik SS, Hunyady L, Luttrell LM, și colab. Independente cai beta-arrestină 2 și G-mediate pentru activarea angiotensinei II a kinazelor 1 și 2 modificate de semnal extracelular. Proc Natl Acad Sci USA. 2003; 100 : 10782-10787. [ Articol gratuit PMC ] [ PubMed ]
  • Whistler JL, Tsao P, von Zastrow M. Un mecanism de frânare controlat de fosforilare controlează endocitoza inițială a receptorilor opioizi, dar nu este necesară pentru sortarea post-endocitică la lizozomi. J Biol Chem. 2001; 276 : 34331-34338. [ PubMed ]
  • White MF, Kahn CR. Sistemul de semnalizare a insulinei. J Biol Chem. 1994; 269 : 1-4. [ PubMed ]
  • Wilden U, Kuhn H. Fosforilarea dependentă de lumină a rodopsinei: numărul de situri de fosforilare. Biochimie. 1982; 21 : 3014-3022. [ PubMed ]
  • Willets JM, Challiss RA, Nahorski SR. Receptorul kinază 6 legată de proteina G legată reglează fosforilarea și desensibilizarea receptorului muscarinic de acetilcolină M3 în celulele neuroblastomului SH-SY5Y uman. J Biol Chem. 2002; 277 : 15523-15529. [ PubMed ]
  • Willets JM, Mistry R, ​​Nahorski SR, Challiss RA. Specificitatea fosforilării și reglării mediată de receptorul kinazei 6 în receptorul G legată de proteina G și semnalizarea semnalizării receptorilor muscarinici de acetilcolină cu o singură celulă. Mol Pharmacol. 2003; 64 : 1059-1068. [ PubMed ]
  • Wu G, Krupnick JG, Benovic JL, Lanier SM. Interacțiunea arrestinelor cu domenii intracelulare ale receptorilor muscarinici și alfa2-adrenergici. J Biol Chem. 1997; 272 : 17836-17842. [ PubMed ]
  • Yuan N, Friedman J, Whaley BS, Clark RB. proteine ​​kinază dependentă de cAMP și mutațiile consensuale ale proteinkinazei C ale receptorului beta-adrenergic. Efectul asupra desensibilizării și stimulării adenililciclezei. J Biol Chem. 1994; 269 : 23032-23038. [ PubMed ]

Articolele de la British Journal of Pharmacology sunt oferite aici prin amabilitatea Societății Britanice de Farmacologie

(Mediafax)


Linkul direct catre Petitie

CEREM NATIONALIZAREA TUTUROR RESURSELOR NATURALE ALE ROMANIEI ! - Initiativa Legislativa care are nevoie de 500.000 de semnaturi - Semneaza si tu !

Comentarii:


Adauga Comentariu



Citiți și cele mai căutate articole de pe Fluierul:

Trădătoare BREXIT-ului.

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

#REZIST – Procurorii DIICOT investigheaza cum au intrat în Romania peste 14.000.000 $ pentru a finanta grupari #rezist pro DNA, Iohannis. Pistele conduc la „portofel virtual” de pe BLOCKCHAIN, al ONG-ului Stefan Batory finantat de Soros

SEX TAPE made in Romania: 4 vedete autohtone FILMATE făcând perversităţi VIDEO

Celula este un SUPERCOMPUTER. Cum are loc Transcripția ADN-ului în ARN-mesager şi mai apoi Translația ARN-ului-mesager în proteine. Care sunt asemănările cu un Program de Calculator?

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

ORGIE în toaleta unui club din România. Totul a fost filmat cu un telefon mobil. VIDEO

TOP 10 cele mai bune ACTRIŢE PORNO din istorie. Sau cum sunt manipulați tinerii de mici FOTO

Prezentatoare TV în sânii goi, după ce a fost trădată de rochie în direct VIDEO

Cum fac SEX rusoaicele, nemţoaicele sau italiencele. Clipul care a făcut senzaţie pe net VIDEO

Privatizarea Sănătății sau Șmecheria lui Dragnea: Salariu Brut Relativ Mare.....dar toți banii curg la Asigurările Sociale, ce urmeaza a fi Privatizate care sunt TRIPLE față de Polonia. Asiguratorii Privați îți freacă deja mâinile de fericire

eNational anunță că "The Movement" - "Mișcarea" lui Steve Bannon (agreată și de Donald Trump) va susține coagularea forțelor conservatoare din România

Smartphone Nokia la 100 de lei și Samsung Galaxy S8 cu preț INCREDIBIL. eMAG dezvăluie 10 produse din oferta de Black Friday

Filme porno şi orgii sexuale într-o instituţie publică din Timişoara

Finlanda:Întreruperea semnalului GPS din timpul recentelor exerciții militare NATO a venit din Rusia

Incident ȘOCANT cu un membru al forțelor speciale Navy SEALS. Iată ce IMAGINE terifiantă au primit prietenii de la el, pe când militarul se afla în Irak. Procurorii au deschis o anchetă

Textul rugăciunii "Tatăl Nostru" va fi modificat. Se schimbă un fragment de frază

eMag, ofertă de Black Friday 2018: Samsung Galaxy S8 la 1.500 de lei, televizor de 80 cm la 400 de lei

Cu toții o știm și o iubim pe FETIȚA ZURLI. CUM ARATĂ în realitate, cum o CHEAMĂ de fapt și ce VÂRSTĂ are | VIDEO

Horoscop zilnic: Horoscopul zilei pentru VINERI 16 NOIEMBRIE 2018. Venus iese din retrograd, Mercur intra

Avionul Egyptair prăbuşit: Analiza uneia din cutiile negre arată că s-a pronunţat cuvântul "foc"

Cum a reușit Traian să pună mâna pe comoara dacilor ascunsă sub râul Sargeția. Aurul strămoșilor noștri a salvat Roma de la colaps

Horoscop weekend 17-18 noiembrie. Pe cine aşteaptă o mare dezamăgire în dragoste. Nu vă lăsaţi duşi de val

Cele mai bune filme erotice pe care le-ai ratat - Video

Cum s-a trăit în România în anii '70- '80? UNII VĂ MINT spunându-vă că s-a trăit permanent prost între anii 1965 - 1989.

Analiza Gramaticala - Clasele V - VIII

Armata europeană, nouă prioritate a cuplului franco-german. Ce este această armată europeană și de ce strnește ea furia SUA

Ce distribuie un deputat PSD pe Facebook: Dragă Uniune Europeana, ești o curvă satanistă

Accident mortal în Colentina

O fostă majoretă a făcut SEX cu un elev de 15 ani! Filmul XXX a ajuns pe INTERNET. VIDEO

​Video-interviu. Socialistă europeană, despre gestul lui Iordache: Oribil, bădărănesc/ PSD ar trebui exclus din rndul socialiștilor europeni, dacă va continua să fie capturat de oameni corupți, ca Dragnea

Cum recunoașteți modelele străvechi de pe IE față de cele inventate recent. Cum recunoști o IE cu modele străvechi românești, de UN KITSCH.

Doliu în televiziunea românească. Prezentatoarea de la "Steaua fără nume" şi "Floarea din grădină" a murit

HOROSCOP 17 NOIEMBRIE 2018: Decizia pe care o iei azi poate şoca pe multă lume. Previziuni complete de weekend

Il Giornale: Rezultatul șocant al unei anchete privind Franța: și păstrează jumătate din banii donați pentru Africa

O nouă tragedie. România a pierdut un mare duhovinc. Preotul a murit fulgerător în urma unui infarct

Doi bărbaţi, condamnaţi la moarte pentru genocid. Sunt responsabili de moartea a aproape două milioane de oameni

Scandalul asistenților romni din Suedia cu diplome fără să fi fost la școală: Ministerul Educației face controale la o școală postliceală / Jurnalista din Suedia care a lucrat la anchetă povestește de la ce a pornit totul

A fost inaugurat Drumul Unirii, care leagă Bistrița-Năsăud de Maramureș prin Munții Țibleșului | FOTO

Jean-Claude Juncker s-a făcut din nou de râs. Acum a apărut în public cu doi pantofi de culori diferite VIDEO

FOTO / Soția lui Kamara, goală pe internet! Vezi reacția artistului

Maria Ghiorghiu, profeţie teribilă despre România: "Blocurile erau pe marginea prăpastiei"

Black Friday 2018. Ce să nu cumperi NICIODATĂ de VINEREA NEAGRĂ. Mulţi români şi-au luat ţeapă

Bancul zilei: Cel mai minunat soț

INTERVIU EVENIMENT | Adrian Sârbu-Ion Cristoiu, față în față. "Jurnaliștii adevărați sunt nemuritori". EXCLUSIV DE LA ORA 12.00

INTERVIU | Hagi 2.0. Cum a crescut Ianis sub îndrumarea "Regelui", cât de tentante sunt ofertele din străinătate și ce spune despre posibilitatea de a evolua pentru naționala Turciei: "Sunt mândru că port numele ăsta"

Experții ONU și-au scurtat vizita n Ungaria/ Autoritățile nu le permit să verifice zonele de tranzit pentru refugiați

Topul celor mai sigure țări din lume pentru călătorii. Care este situația în România

Băsescu: Tot ce fac Dragnea, Tăriceanu, Dăncilă este diletantism. Bruxelles-ul o să-i răspundă "rămâi mămică suverană, dar nu ne mai căuta"

Financial review Prima pagină a presei străine: n rugăciunea Tatăl Nostru va fi nlocuit un vers. Interviu cu Manfred Werner, posibil viitor șef al CE. Theresa May promite să lupte pentru Brexitul ei. Vestele galbene, un fenomen dificil de definit

Horoscop weekend 16-18 noiembrie 2018. După impulsivul Marte, acum şi Luna este în Peşti! Cum îţi schimbă zilele?

UE E FEUDA LUI SOROS. Fluierul.ro vă prezintă în premieră pentru România întâlnirile lui SOROS cu Comisarii UE de la Bruxelles pe ore, minute, zile, săptămâni, luni, ani...Ghiciți cu cine s-a întâlnit SOROS la Bruxelles chiar pe 1 februarie 2018?

O nouă tragedie la Iași: O asistentă a murit după ce a fost lovită de o mașină pe o trecere de pietoni

Exclusiv Digi 24: Nigel Farage, reacție dură după rezoluția PE n cazul Romniei. Mesajul pentru romni

Plantaţie de lavandă şi goji în locul fabricii metalurgice promise la Olteniţa. Ce surprize a pregătit familia Gupta pentru Galaţi?

Accident horror pe autostradă, 42 de morţi şi 27 de răniţi. Autobuzul a sărit în aer de la canistrele unui călător

Frumoasa asta fură meserie de la Busu

MIREASĂ prinsă de CAVALERUL de ONOARE în timp ce îşi înşela SOŢUL: Cine este BĂRBATUL ăsta? VIDEO

Germania: Ministrul de interne ia în considerare expulzări de refugiați spre Siria

HOROSCOP 16 NOIEMBRIE 2018: Ziua împinge multe zodii pe căi nebătătorite. Previziunile zilei

Un cutremur de 2,7 grade pe scara Richter s-a produs în zona seismică Vrancea

Inundaţii în deşert. Cămilele s-au speriat de puhoaiele de apă VIDEO

Caru cu vedete: Mihai Bobonete, reacție fabuloasă după ce a văzut delfini din pluș cu penis ntr-un magazin; Regina a fost sufletul petrecerii la ziua Prințului Charles; Delia s-a mbrăcat n culori fondante și a făcut show printre acadele, la Sala Palatului

O viitoare mireasă a aflat că partenerul o înșela chiar cu o seară înainte de nuntă. A reușit să se abțină, iar ce a făcut tânăra în fața altarului a fost total NEAȘTEPTAT. "Tu o vei face?"

Theresei May i fuge pămntul de sub picioare: 48 de parlamentari conservatori au demarat procedura pentru demiterea ei

Un adolescent de 17 ani a lovit cu maşina o femeie, apoi a fugit de la locul accidentului

Cele mai nepotrivite zodii pentru o relatie pe termen lung

Producătorul biscuiților Oreo, vizat de Greenpeace pentru salvarea urangutanilor

BLACK FRIDAY 2018 ALTEX. Catalogul celor mai mari reduceri

Șansele migranților din America Centrală de a intra în SUA sunt ''practic nule'', e ''foarte riscant'' (ministru)

Estonia se alătură statelor care refuză să adere la pactul ONU privind migrația

Retenţia de apă. Cum să elimini balonarea şi excesul de apă din corp în doar 4 zile!

Turneul Campionilor | Federer a spulberat temerile fanilor și și-a luat o dulce revanșă: s-a calificat pentru a 15-a oară în semifinale. Clasamentul final în Grupa "Hewitt" + când revine pe teren elvețianul

Replica dată de Macron lui Trump: Nu fac politică sau diplomație prin mesaje pe Twitter

Căutat de justiția progresistă controlată de cine trebuie, fostul premier macedonean conservatorul Nikola Gruevski a fugit n Ungaria, unde a cerut azil politic

"Mărimea contează", o tânără şi-a dat în judecată iubitul. Ce acuzaţii inedite îi aduce femeia după ce cuplul s-a destrămat

CALENDAR ORTODOX 2018: Mare sărbătoare, de ce se lasă oalele cu gura-n jos sâmbătă. Cum scapi de boli şi atragi norocul

Momentul în care Ecaterina Andronescu i-a făcut PRAF pe Liviu Dragnea și Viorica Dăncilă: "Pentru binele României..."

Primarul orașului Arad candidează la alegerile europarlamentare din 2019

HOROSCOP. Zodiile cu NOROC URIAŞ în următorii 5 ani. Se vor îmbogăţi rapid

ULTIMA ORĂ: Dică a anunțat unde se mută FCSB-ul! Sacrificiul făcut de gazde pentru vicecampioană: "Vor încerca să mute meciul pentru ca gazonul să nu se deterioreze"

Traian Băsescu îi ia apărarea soţiei lui Iohannis: De ce a trebuit să se afle public că doamna Iohannis e chemată ca martor la Parchet?

Unul dintre cele șapte filme pierdute Oswald a fost găsit n Japonia. Arhiva Disney a confirmat că este filmul este autentic

Actorii teatrului din Constanța care au semnat scrisoarea n care acuză abuzuri grave ale directoarei Dana Dumitrescu au fost dați afară din distribuția unui spectacol. Consiliul Județean Constanța anunță un control la teatru

6 ponturi feng shui pentru abundenţa ta financiară

Julian Assange, fondatorul WikiLeaks, a fost inculpat în secret în Statele Unite

(P) Top Shop a pregatit reduceri de pana la 70% de Black Friday 2018

Copilul jandarmeriţei din Suceava, ucisă pe o trecere de pietoni, a fost transferat la Bucureşti

Facebook va institui o curte de apel pentru evaluarea conținutului controversat

eMAG.ro BLACK FRIDAY, catalogul pe 2018. Peste 3 milioane de produse la reducere

ȘTIRILE OREI 09.00

Baschet: NBA - Houston Rockets renunță la serviciile lui Carmelo Anthony

Topul celor mai sigure ţări din lume, pentru turişti. România se află pe acelaşi loc cu Mexic şi Columbia, la unul dintre capitole

China cere companiilor tech să colecteze datele ct mai detaliate ale utilizatorilor

EXCLUSIV | Cluburile din Europa își îndreaptă atenția spre Liga 1: "Au fost discuții". Totul a fost confirmat! Când s-ar putea face mutările și despre ce echipe e vorba

Tenis: Turneul Campionilor - Federer l-a învins pe Anderson și s-a calificat în semifinale

SUA se pregătește să nceapă urmărirea penală a lui Assange

Wall Street Journal: Cel mai bun acord prost pe tema Brexit-ului. Acordul dnei May e groaznic dar este singurul

MOSTENIREA nestiuta a lui Ceausescu! America e SOCATA de ce a descoperit in Romania
ULTIMA ORA: Dusmanii tarii vor sa ascunda adevarul

Poveste adevărată. "Sunt Irina, am 20 de ani şi am facut videochat în..."

Fiica unui om de afaceri s-a spânzurat la 32 de ani, chiar înaintea nunţii. Mii de mesaje pe internet

Rugby: CSA Steaua, prima echipă calificată în semifinalele Cupei României

Exercițiu româno-american de apărare chimică, biologică, radiologică și nucleară

Au fost descoperite urmele celui mai mic dinozaur din lume. Acesta avea dimensiunile unei vrăbii şi tria în Asia VIDEO

n Canada a fost descoperit un organism care nu se ncadrează n niciun regn cunoscut. Este mai diferit de restul ființelor dect animalele de ciuperci

BILANȚUL LUI UEDZI DUPĂ 1 LUNA DE JOC +1.52. Cel mai tare program AI de Pariuri din Lume! Meciurile de AZI si ISTORICUL MECIURILOR din 15 septembrie 2018 alese și pariate de UEDZULA alintat UEDZI, programul de inteligență artificială al Fluierul.ro

VIDEO WTA: Finala Simona Halep vs Sloane Stephens, de la Montreal, meciul anului 2018

De ce s-a sinucis Oana Ioja. Motivul pentru care a recurs la GESTUL EXTREM

Mărturie ŞOCANTĂ a criminalului din Braşov care şi-a măcelărit familia. ESTE ÎNGROZITOR!

Guvernul Benjamin Netanyahu riscă să piardă majoritatea și să convoace alegeri anticipate

Consilierii generali USR cer prelungirea Planului Urbanistic General pentru a nu bloca piața construcțiilor: Gabriela Firea stă și privește cum Bucureștiul se scufundă

Cum a furat o femeie o brățară cu diamante de 85.000 lei, dintr-un mall din Capitală

Soluția autorităților din Brașov, după ce bradul de Crăciun a fost criticat de oameni

Experiența unui medic la ușa ministrului Sănătății: Am așteptat în frig o oră jumătate. Ce poate determina un ministru să ne cheme de la sute de km și să nu vină?

Dinamo - Concordia, amical cu porțile închise! Ce prim 11 folosesc Rednic și Dorinel Munteanu

VIDEO 15 ani de la debutul lui Lionel Messi la FC Barcelona

A expirat "creditul" lui Alibec. Antrenorul care nu s-a mai ferit de cuvinte: "Du-te, bă, frățioare și fă altceva!"

Meleșcanu l-a primit pe ambasadorul desemnat al Iranului; au fost abordate teme de actualitate de pe agenda regională și internațională

Ministerul Justiției transmite că OUG care reglementează cadrul de funcționare a Fondului Suveran Investiții poate fi neconstituțională

Black Friday. Ford Fiesta din 2017 la puţin peste 7.700 de euro şi reduceri totale de peste 900.000 de euro la autoturisme


Pag.1 Pag.2 Pag.3 Pag.4 Pag.5 Pag.6 Pag.7
Pag.8 Pag.9 Pag.10 Pag.11 Pag.12 Pag.13 Pag.14 Pag.15
Pag.16 Pag.17

Nr. de articole la aceasta sectiune: 1969, afisate in 17 pagini.



ieri 16:50