23:59
Comentarii Adauga Comentariu

VACCINAREA HPV DISTRUGE CREIERUL. STUDIU ȘTIINȚIFIC PUBLICAT ÎN REVISTA "NATURE": "Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis"

Din studiu: "În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare".

Figura 4: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Secțiunile din creierele șoarecilor vaccinați și cu Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 20 μm.



(traducere încă needitată complet)

Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis

Satoko Aratani, Hidetoshi Fujita, Yoshiyuki Kuroiwa, Chie Usui, Shumpei Yokota, Ikuro Nakamura, Kusuki Nishioka & Toshihiro Nakajima

Rapoarte științifice volumul 6 , Articol: 36943 (2016)

doi : 10.1038 / srep36943

Moartea celulelor în sistemul nervos Modele experimentale ale bolii

Primit: 05 mai 2016

Admis: 24 octombrie 2016

Publicat: 11 noiembrie 2016


RETRAS: 11 mai 2018 - (CENZURĂ: lobby-ul pharma a reușit retragerea studiului la doi ani de la acceptarea și publicarea lui).


Actualizat online 11 mai 2018

Abstract

Vaccinarea este cel mai puternic mod de a împiedica ființele umane să contracteze boli infecțioase, inclusiv viruși.

În cazul vaccinului împotriva papilomavirusului uman (HPV), a fost raportată și rămâne a fi atent verificată o entitate de boală neașteptat de nouă, sindromul neuroimunopatic asociat vaccinării HPV (HANS).

Pentru a elucida mecanismul HANS, am aplicat o strategie similară cu modelul encefalitei experimentale autoimune (EAE) - unul dintre cele mai populare modele animale folosite pentru a induce o schimbare imunologică maximă în sistemul nervos central. Surprinzător, șoarecii vaccinați cu toxină pertussis au prezentat fenotipuri neurologice care includ reacția scăzută a reflexului coapsei și a mobilității locomotivelor.

Analizele patologice au relevat afectarea regiunilor hipotalamice și circumventriculare din jurul celui de-al treilea ventricul, și aceste regiuni conțin celule endoteliale vasculare apoptotice. Aceste date au sugerat că donatorii vaccinați cu HPV care sunt susceptibili de vaccinul HPV ar putea dezvolta HANS sub anumite factori de mediu.

Aceste rezultate ne vor da noua perspectiva asupra modelului patologic murin al HANS si ne vor ajuta sa gasim o modalitate de tratare a pacientilor care sufera de HANS.

Introducere

Există o lungă istorie a luptei dintre ființele umane și bacteriile invazive și virușii. În secolul al 19-lea, Edward Jenner a dezvoltat cu succes și a administrat primul vaccin pentru oameni pentru a proteja împotriva variolei. În secolul al XX- lea, descoperirea penicilinei de către Walther Fleming a făcut posibilă uciderea directă a bacteriilor. Aceste două evoluții terapeutice ne-au oferit nu numai o modalitate de a preveni și trata bolile infecțioase, dar au dus, de asemenea, la o îmbunătățire extraordinară a bunăstării umane.

Cancerul de col uterin este cel mai frecvent tip de cancer la femei și este cancerul asociat cu cea mai mare rată de deces la femeile cu vârsta sub 44 de ani. Pentru că infecția cu virusul papilloma uman (HPV) este necesară pentru apariția cancerului de col uterin, protecția împotriva HPV este eficientă în evitarea bolii [1, 2]. Există 40 de tipuri de HPV care pot infecta epiteliul anogenital la om și 15 tipuri de virus sunt asociate cu cancerul de col uterin [3 , 4].

În general, vaccinul este destinat prevenirii bolilor infecțioase.

Pentru a preveni infecția cu HPV, s-au dezvoltat două vaccinuri profilactice;

Un vaccin tetravalent (Gardasil ® , Merck & Co, SUA) împotriva particulelor de virus L1-like la tipurile de HPV 6, 11, 16 și 185 ,

Şi un vaccin HPV bivalent (Cervarix ® ; Glaxo Smith Kline, Londra) împotriva tipurilor 16 și 18, care sunt considerate a fi cele mai frecvente dintre cele 15 tipuri asociate cu cancerul de col uterin.

Studiile clinice au evidențiat faptul că Gardasil și Cervarix sunt sigure și eficiente împotriva cancerului de col uterin 6 ; astfel, cele două vaccinuri au fost introduse pentru administrare în 2006, aproximativ 175 de milioane de doze fiind distribuite în întreaga lume de atunci.

Asemenea oglinzii lui Janus, totuși, imunizarea și vaccinarea au două aspecte diferite și se crede că unele tipuri de reacții imune puternice evocate conduc la reacții adverse semnificative.

De exemplu, câteva cazuri au determinat ca vaccinul să fie cauza reacțiilor gazdă anormale și disregulate, determinând febră sistemică, durere locală la locul injectării, deficit neurologic asemănător sindromului Guillain-Barré și simptome asemănătoare autoimune și curând.

Pentru a evoca o reacție imunologică completă și adecvată, vaccinurile includ adjuvantul de aluminiu în plus față de particulele asemănătoare virusului ca antigene.

Stimularea cronică a sistemului imunitar prin adjuvanți poate avea ca rezultat o boală autoimună caracterizată prin mialgie, artralgie, oboseală cronică [7, 8].

Pentru vaccinarea cu HPV, există două articole recente bine documentate recente.

Palmieri B. et al au raportat apariția unor sindroame severe somatoforme și disăutonomice după vaccinarea HPV 9 și Brint L. și colab . a descris asemenea debutul disautonomie după vaccinare tetravalent 10.

Ambele recenzii au indicat în mod clar prezența reacțiilor adverse unice asociate vaccinării cu HPV, inclusiv dureri de cap, oboseală, depresie, disfuncții cognitive, mișcări incontrolabile și involuntare și slăbiciune a membrelor.

Pentru aceste manifestări clinice, am prezentat aceste reacții ca sindrom neuroimunopatic asociat vaccinării cu papilomavirus uman (HANS) și cu criterii de diagnostic propuse. Sindromul HANS este considerat a fi format din patru domenii clinice;
(i) simptomele autonome, endocrine și inflamatorii;
(ii) simptome cognitive și emoționale;
(iii) simptome de hipersensibilitate de mediu și durere și
(iv) locomoție și simptome motorii [11], 12.

Mai multe studii clinice privind simptomele HANS au arătat, de asemenea, că vaccinurile HPV pot influența sistemul nervos central (CNS) [10 , 13 , 14 , 15].

În acest studiu, pentru a înțelege mai bine mecanismele moleculare ale HANS, încercăm mai întâi să stabilim un model animal al sindromului. Apoi am analizat leziunile patologice ale modelului HANS murin prin concentrarea asupra SNC.

Rezultate

Administrarea vaccinului HPV

Pentru a evalua efectele neurofiziologice ale vaccinului HPV, 48 de șoareci femele au fost fie imunizate cu Gardasil, fie cu o soluție salină tamponată cu fosfat (PBS), ca martor (Figura 1-a).

A fost administrată toxina pertussis (Ptx) ulterior vaccinării pentru a facilita accesul vaccinului la SNC prin modularea barierei hemato-encefalice (BBB) 16 .

Ca un control al encefalomielitei autoimune, s-a utilizat glicoproteina oligendendocitului mielin (MOG) 35-55 17.

Administrarea PBS sau Ptx nu a avut nici un efect (grupul 1, 2), iar perturbarea BBB de către Ptx în sine a fost confirmată că nu are efect.

Șoarecii din grupurile 5 și 6 aparțineau grupurilor experimentale de encefalită autoimună (EAE). Șoarecii din lotul 6 care au primit MOG și Ptx au prezentat cozi paralizate în 2 săptămâni și diferite simptome neurologice, cum ar fi pareza membrelor posterioare după 3 săptămâni.

Șoarecii din grupul 5, care au primit MOG fără administrare de toxine, au prezentat, de asemenea, simptome neurologice, care au avansat mai lent decât lotul 6 așa cum a fost raportat anterior la 18.

Șoarecii din grupurile 3 și 4 au aparținut grupurilor de tratament cu Gardasil. După o a treia injecție cu vaccin (4 săptămâni de la prima imunizare), trei din 16 șoareci din grupul 4, care au fost tratați cu Gardasil și Ptx, a prezentat o coadă cu tensiune redusă și o mișcare ce indica slăbiciune ( Fig. 1-b ). Incapacitatea motorie a fost evaluată prin utilizarea unui scor EAE (scară, 0-6) [19].

Deși severitatea simptomatică a variat, peste 50% dintre șoareci (12/21) au prezentat disfuncții motorii similare, inclusiv picăturile de coadă așa cum se arată în figura 1-a , pe parcursul studiului.

Doi dintre cei 14 șoareci cu imunizare secvențială prin administrarea vaccinului Gardasil în monoterapie (grupa 3) au prezentat disfuncții motorii mai ușoare în comparație cu grupul tratat combinat cu Gardasil și Ptx ( Figura 1-b, c).

Am confirmat comportamentul acestor șoareci prin testul cu o bară orizontală și prin testul ecranului inversat Kondziela 20 , 21 .

S-a observat o scădere semnificativă a coordonării motorii în grupul de tratament combinat cu Gardasil și Ptx, comparativ cu grupul de control.

Dimpotrivă, nu au existat diferențe în concentrația musculară dintre aceste grupuri, (Figura 1).

În total, aceste rezultate sugerează că administrarea combinată a vaccinului HPV și Ptx ar putea induce leziunea la SNC murinic.

Figura 1: Administrarea vaccinului HPV la șoareci. ( a ) combinarea reactivilor pentru injectare și evaluarea șoarecilor cu simptome neurologice, ( b ) fenotipul neurologic asociat cu vaccinarea și ( c ) scorul severității bolii.

Imagine de dimensiune completă

Analize patologice

Pentru investigarea ulterioară a leziunilor neuropatologice asociate vaccinării cu HPV, s-au efectuat analize histologice ale creierului. In general, grupurile nu au prezentat diferente in marimea sau greutatea creierului. Disecțiile cerebrale seriale au fost obținute la 12 săptămâni după prima imunizare și au fost colorate cu hematoxilină și eozină (H & E) și cu colorarea Klüver-Barrera (KB).

Colorația H & E a evidențiat ventriculele treia contractate la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx (figura 2-asuperior).

Pe de altă parte, șoarecii care au suferit EAE, arătând paralizia coapsei și a membrelor posterioare, nu păreau să-şi fi redus ventriculii treia.

În mod similar, tratamentul cu Ptx sau Gardasil în monoterapie nu a condus la stenoză treilea ventricular.

Diferențele morfologice nu au fost, de asemenea, detectate în cerebel, măduva spinării sau în cortex la șoareci tratați cu Gardasil în monoterapie, Ptx și Gardasil cu Ptx (Grupa 1, 2, 3 și 4).

Secțiunile secționale ale brațelor anterioare de la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx au fost colorate și au arătat că cel de-al treilea ventricul a fost remarcabil îngustat pe o gamă largă de brațe antebrale de la porțiunea anterioară la cea posterioară (figura 2-b).

Împreună, analizele noastre sugerează că tratamentul cu vaccin HPV ar putea afecta mărimea ventriculului și presiunea fluidului cerebrospinal (CSF).

Figura 2: Histologia creierului tratat cu vaccinul HPV. ( A ) H & E (superior) și KB (inferior) colorarea secțiunilor emisferelor din fiecare grupă ( b ) colorație H & E a secțiunilor coronale seriale ale encefalului de la șoarecii tratați cu vehicul ( de sus) și cu vaccin și Ptx (inferior) ( c ) KB colorarea secțiunilor coronale seriale. Scala bară, 2,5 μm ( d ) colorație H & E (superioară) și KB (inferioară) a secțiunilor periventriculare ale creierului de la șoareci cu deficite neurologice. Scară de bare, 500 μm.

Imagine de dimensiune completă

Pentru a confirma relația dintre efectele vaccinului HPV asupra funcției motorii și modificările histologice, diferențele din jurul celui de-al treilea ventricul au fost comparate între șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx.

În grupul tratat cu vaccin, cel de-al treilea ventricul a fost îngustat la toți șoarecii care prezintă picături de coadă.

În plus, gradul de îngustare a ventriculului treilea pare să corespundă gravității întreruperilor la tonul coapsei (figura 2-d). In colorație H & E a nucleelor hipotalamice paraventricular (PVN), nucleele dorsomedial hipotalamo (DMH) și nucleele arcuate de la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx, a indicat mai puține nuclee colorate decât la șoarecii din celelalte grupuri ( Fig. 2-b, d ). KB colorarea aceleiași structuri a evidențiat, de asemenea, o scădere a numărului de nuclee și a corpurilor Nissl (Figura 2-c, d ). În plus, am confirmat efectele asupra inflamației prin vaccinul HPV și Ptx. Nu a fost observată filtrarea limfocitelor în creierul anterior ( figura 2-b ).

Inducerea apoptozei în regiunile circumventriculare

Scăderea numărului de celule ne-a determinat să evaluăm asocierea dintre vaccinarea cu HPV și apoptoza din creierul anterior.

Pentru a face acest lucru, am efectuat testul TUNEL pe secțiuni ale creierului anterior. În secțiunile obținute de la animale tratate cu vehicul și Ptx, am găsit un număr limitat de celule TUNEL-pozitive cu nuclei marcate - ceea ce confirmă faptul că Ptx singur nu a induce apoptoza.

Între timp, au fost găsite mai multe celule TUNEL-pozitive în talamus și hipotalamusul obținut șoareci tratați cu Gardasil și Ptx ( Figura 3).

De fapt, s-au observat de șapte ori mai multe celule TUNEL pozitive la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx, în timp ce de patru ori mai multe celule apoptotice au fost găsite la șoareci tratați cu Gardasil în monoterapie decât celulele apoptotice la șoarecii vehicul (netratați).

În special, numărul celulelor marcate a fost mai mare în jurul celui de-al treilea ventricul și la vasele din PVN și DMH. Împreună, aceste date susțin o asociere între apoptoză și deteriorarea structurilor neuronale murine cauzate de administrarea vaccinului HPV și Ptx.

Figura 3: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 500 μm și 50 μm.

Imagine de dimensiune completă

Identificarea celulelor apoptotice

Apoi, am căutat să determinăm ce tipuri de celule au fost afectate de apoptoză.

Deoarece celulele apoptotice au fost observate în jurul vaselor, am marcat secțiuni folosind markeri pentru celule endoteliale vasculare, pericyte și astrocite. Celulele care exprimă CD31 au fost în concordanță cu celulele apoptotice legate la vase ( fig.4 ), în timp ce celulele care exprimă NG2- sau GFAP nu au fost colorate.

Rezultatele arată că vaccinul HPV a indus apoptoza celulelor endoteliale vasculare.

Figura 4: Imunohistochimia brațelor anterioare ale șoarecilor vaccinați. Secțiunile de momeală din șoarecii tratați cu vaccin și Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm.

Imagine de dimensiune completă

Neurotransmisia în regiunile circumventriculare

În cele din urmă, pentru o mai bună înțelegere a leziunilor neuronale în administrarea combinată a vaccinului HPV și a șoarecilor Ptx, am evaluat subtipurile interneuron în regiunile circumventriculare ( Fig.5 ). Ca rezultat al colorării imune, tirozina hidroxilaza (TH) a fost crescută în PVN, în special nucleele arcuite, la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx comparativ cu zona șoarecilor vehicul. Pe de altă parte, decarboxilaza acidului glutamic (GAD) 67 și acidul gama-aminobutiric (GABA) a fost scăzută în PVN. Expresia glutamin sintetazei, colina acetiltransferaza nu a fost schimbata. Aceste rezultate au arătat că neuronii dopaminergici au fost crescuți în nucleele arcuite, în timp ce neuronii GABAergici au fost reduse.

Figura 5: Imunofaringizarea interneuronului în regiunile circumventriculare. Secțiunile din creierul anterior din șoarecii tratați cu vaccin HPV și Ptx au fost colorați cu anti-TH, GAD67, cholină acetiltransferază (CA) și sintetază de glutamină (GS). Scară de bare, 500 μm.

Imagine de dimensiune completă

Discuţie

În acest studiu, am demonstrat că administrarea combinată a Gardasil și Ptx a indus o mișcare slabă a cozii și o mobilitate scăzută a locomotivelor. În plus, vaccinarea nu a avut efect asupra forței musculare. Observația neuropatologică relevă următoarele rezultate; (1) leziuni structurale la PVN, DMH, (2) atrezia ventriculară treia, (3) o creștere a apoptozei în jurul cavităților talamusului și hipotalamusului; celulele endoteliale vasculare din hipotalamus au fost afectate în mod special și (4) creșterea sintezei TH și scăderea sintezei GABA în nucleele arcuite.

Mobilitatea scăzută a locomotivelor șoarecilor din grupa 4 ( fig.1 ) a fost derivată din întreruperea rețelelor motorii hipotalamice, deoarece modificările patologice au fost discret localizate la structurile circumventriculare ( Fig.2 ), iar forța musculară a fost normală. Mai multe experimente pe animale au evidențiat importanța hipotalamusului pentru comandarea motorului și indică faptul că semnalele de comandă hipotalamice sunt responsabile în primul rând de conducerea locomoției și că pasul locomotor este mediat de hipotalamusul perimorfian și lateral 22 , 23 , 24 , locomoția și salturile scăpate sunt mediate de hipotalamus medial 25. Hipotalamusul are, de asemenea, un rol important în integrarea circuitelor neuronale pentru reglarea motorului, cu conexiuni la cortexul cingular al motorului în sistemul limbic, care se proiectează spre maduva spinării și nucleul roșu și au funcții premotor 26 . Deoarece mobilitatea scăzută a corpului asupra mișcărilor locomotive poate fi observată frecvent și la pacienții care suferă de HANS, am presupus că deficiențele locomotive atât în ​​fenotipul motor murin cât și în HANS uman sunt legate de zonele motorii hipotalamice perturbate.

Ventriculele cerebrale sunt umplute cu CSF și constituie o rețea de comunicare ce leagă cavitățile 27 . Datele noastre sugerează că vaccinarea împotriva HPV poate induce apoptoza celulelor endoteliale vasculare și poate perturba barierele BBB-CSF. Mai mult, îngustarea ventriculului ar fi putut fi cauzată de prăbușirea barierelor dintre creier și ventriculi, determinând CSF să curgă din creier 28 . CSF este important pentru menținerea homeostaziei creierului, iar îngustarea ventriculilor este adesea observată la pacienții care suferă de sindromul hipotensiunii intracraniene (ICH). Ca și mecanismul propus pentru îngustarea ventriculului observat în studiul actual, ICH este cauzată de scurgerea CSF și presiunea scăzută a CSF 29. Interesant, unele dintre aceste simptome clinice sunt experimentate de persoanele care suferă de HANS, cum ar fi cefaleea ortostatică, amețeli, rigiditate și așa mai departe 30 . Deși în prezent nu există informații patologice cu privire la HANS, ar putea fi important să se investigheze efectele vaccinării asupra funcției CSF și a caracteristicilor patologice din jurul celui de-al treilea ventricul în viitor.

În mod surprinzător, NK2 Homeobox 1 (Nkx2.1), cunoscut și ca șoareci cu deficit de factor de transcripție pentru factorul 1 de tiroidă (TTF-1), a fost stabilit și prezintă trăsături morfologice similare, inclusiv afectarea structurală a PVN și DMH și a atresia treilea ventricular la la șoarecii tratați cu vaccin în acest studiu. Nkx2.1 a fost identificat ca un factor de transcripție pentru factorii specifici tiroidieni 31 , 32 și a fost de asemenea stabilit ca un factor important pentru dezvoltarea creierului timpuriu 33 . Nkx2.1 este exprimată în regiunea ventrală a creierului prealabil 34 , 35. La șoarecii cu deficit de Nkx2.1, se observă anomalii în regiunile ventrale și medii ale hipotalamusului, cel de-al treilea ventricul este îngustat și nu ajunge la podeaua diencefalului 36 . Nkx2.1 este de asemenea cunoscută ca fiind exprimată în regiunea hipotalamică și în zonele periventriculare de la faza incipientă a dezvoltării la adulți 35 . În plus, se consideră că Nkx2.1 joacă roluri în pubertate și în funcția de reproducere și în schizofrenia 35 , 37 , 38 . La om, mutațiile genei Nkx2.1 pot provoca o corecție ereditară benignă (BHC) 39 , 40, o boală care afectează creierul, plămânii și tiroida. Pacienții cu această mutație suferă de o coreeană, o varietate de caracteristici neurologice, tremor, distonie axială și tulburări de mers 41 . Luând în considerare literatura de specialitate, datele noastre actuale sugerează că vaccinul HPV poate perturba calea de semnalizare mediată de Nkx2.1 care este exprimată în regiunea hipotalamică. Am studiat pe producerea neurotransmițătorilor , în scopul de a confirma corelarea fiziopatologic Nkx2.1, deoarece unele studii au indicat anomalii ale mai multor neurotransmitatori producției în Nkx 2.1 cu deficit-soareci in dezvoltarea timpurie 42 , și de asemenea la soareci adulti 35 , 38. Am găsit un fenotip similar al producției de neurotransmițători la șoarecii din grupa 4, inclusiv creșterea neuronilor dopaminergici și a neuronilor GABAergici redus ( Figura 5 ). Aceste rezultate pot explica simptomele sistemului endocrin în sindromul HANS.

Am arătat recent că funcțiile hipotalamusului sunt implicate în studiile clinice prin HANS. Testele funcției endocrine au arătat rezultatele care sugerează disfuncția hipotalamică. Tulburările HANS nu sunt de origine psihogenică, ci provin de la tulburările neuro-endocrinologice ale hipotalamusului și ale rețelelor sale limbice 15 . Mai mult, s-au acumulat dovezi care indică faptul că hipotalamusul este preocupat de anumite elemente de comportament / emoție 22 , 24 , 25 și important pentru reglarea durerii 43 , 44. PVN și DMH, afectate în modelul nostru HANS murin, controlează integral autonom, endocrin și joacă un rol important în întreținerea homeostatică pentru aceste funcții. Progresele recente în neuroștiință au evidențiat importanța PVN pentru plasticitatea sinaptică legată de stres în hipotalamusul 45. DMH și nucleul suprachiasmatic (SCN) au rolul lor în controlul circadian al somnului și, respectiv, în stimulatorul cardiac circadian, respectiv. Leziunile DMT excitotoxice reduc ritmul circadian al activității de veghe, hrănire și locomotor. Prin urmare, am presupus că focalizarea probabilă în HANS ar trebui să fie pe hipotalamus și organele circumventriculare din jurul ventriculului treilea, caracterizată de barieră hematoencefalică, întâmplător acele rapoarte clinice despre funcțiile hipotalamusului sunt în concordanță cu datele noastre folosind modelul de șoarece.

În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare. Este posibil să observăm că numai vaccinul HPV are ca rezultat un fenotip mai slab; mai degrabă, o tulpină de șoarece care este o tulpină hiper-susceptibilă în reacția sa imună (de exemplu, C57BL6) și adăugarea de Ptx care dăunează BBB sunt necesare. S-ar putea să existe fete hipersensibile la vaccinul HPV din cauza factorilor predispozanți neclare și / sau a evenimentelor concomitente de mediu care cauzează probabil o deteriorare a BBB (similar cu leziunea indusă de Ptx în studiul actual). O combinație variabilă a acestor factori poate duce la suferința individuală de la HANS. Sunt necesare analize suplimentare pentru verificarea acestei posibilități;

Metode aplicate pe Șoareci

Șoareci C57BL / 6 de sex feminin în vârstă de șase săptămâni au fost achiziționați de la Sankyo Laboratory (Japonia) și au fost utilizați pentru studiile de vaccinare. Șoarecii au fost ținute în condiții standard în instalația de animale de la Tokyo Medical University și au fost înzestrate cu hrană și apă ad libitum. Toate experimentele pe animale au fost aprobate de Comitetul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor instituționale al Universității Medicale din Tokyo (numerele de aprobare: s-27050 și s-28039) și au fost realizate în conformitate cu liniile directoare instituționale, științifice și naționale pentru experimentarea pe animale.

Reactivi și anticorpi

Antigenul pentru encefalomielita autoimună experimentală (EAE) și toxina pertussis (Ptx) au fost achiziționate de la Hook Laboratories, iar vaccinul HPV Gardasil a fost achiziționat de la MSD KK Următorii anticorpi au fost utilizați în acest studiu: anti-NG2, anti-GAD67 și anticorpi anti-tirozină hidroxilază de la Merck Millipore (Germania); anti-GFAP, CD31, anticholină acetiltransferază și sintetază anti-glutamină de la Abcam (Cambridge, UK); anticorp anti-GABA de la Sigma-Aldrich.

Vaccinare

Grupuri de șoareci femele C57BL / 6 în vârstă de 11 săptămâni au fost administrați intramuscular 100 pl de Gardasil sau soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) pentru un total de cinci ori. Ptx a fost administrat intraperitoneal 2 și 24 de ore după imunizare. Vaccinul Gardasil sau Ptx au fost administrate la intervale de 2 săptămâni sau respectiv 4 săptămâni. Ca martor, EAE a fost indusă cu glicoproteina oligonendrocyte mielină 35-55 (MOG 35-55 ) urmată de instrucțiunile producătorului (Hooke Laboratories, USA). Gravitatea bolii a fost evaluată în conformitate cu următoarele scoruri 19; 0, fără anomalie; 1 coada parțială; 2, pierderea tonicității cozii; 3, paralizie parțială a membrelor posterioare; 4, paralizie a membrelor posterioare complete; 5, paralizie anterioară sau moribundă; 6, moarte. A fost evaluat cel mai sever simptom al fiecărui șoarece pe parcursul studiului.

Histologie

Șoarecii au fost anesteziați și transcardiali perfundați cu PBS și formaldehidă 10% în PBS. Creierele au fost apoi îndepărtate, fixate în formaldehidă 10% și încorporate în parafină. Au fost obținute secțiuni de 5 micrometri și au fost deparafinate. Pentru analizele morfologice generale au fost utilizate colorații hematoxilină și eozină (H & E) și Klüver-Barrera (KB). Pentru imunohistochimie, am efectuat regăsirea antigenului prin încălzirea secțiunilor în tampon citrat și stingerea activității peroxidazei endogene prin incubarea secțiunilor în peroxid de hidrogen 3%. Secțiunile au fost blocate cu albumină serică de bovină 10% (BSA) în PBS și incubate cu anticorpi primari. După incubarea cu anticorpi secundari conjugați cu peroxidază de hrean (HRP), anticorpii legați au fost detectați cu 3,3-diaminobenzidină. Secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină,

Analiza TUNEL

Creierele de șoarece au fost fixate în formaldehidă 10% în PBS și au fost încorporate parafină. Secțiunile s-au tăiat la 5 pM și s-au deparafinizat utilizând o procedură standard. Testarea TUNEL a fost efectuată utilizând un kit de detectare a apoptozei in situ (Takara bio Inc. Japonia), secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină.

Sursa: Nature.com - Murine hypothalamic destruction with vascular cell apoptosis subsequent to combined administration of human papilloma virus vaccine and pertussis toxin


(Fluierul)


Linkul direct catre Petitie

CEREM NATIONALIZAREA TUTUROR RESURSELOR NATURALE ALE ROMANIEI ! - Initiativa Legislativa care are nevoie de 500.000 de semnaturi - Semneaza si tu !

Comentarii:


Adauga Comentariu



Citiți și cele mai căutate articole de pe Fluierul:

Federaliștii din Comisia de la Veneția se pișă pe Parlament, pe CCR și pe Constituția României. Comisia vrea să facă Legile Justiției din România exact pe DOS decât le-a votat Parlamentul legitim ales și pe Dos decât le-a validat Curtea Constituțională

Războiul progresist împotriva Curiozității și a Libertății de Gândire. VIDEO - Uitați-vă în ce hal i-a îndoctrinat rețeaua progresistă pe tinerii din ziua de azi și la ce fanatism au ajuns. Marx, Engels și Lenin aplaudă din morminte

O fostă majoretă a făcut SEX cu un elev de 15 ani! Filmul XXX a ajuns pe INTERNET. VIDEO

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

SEX TAPE made in Romania: 4 vedete autohtone FILMATE făcând perversităţi VIDEO

OPRIȚI JAFUL. NORVEGIA. Sistemul de taxare al Petrolului. Norvegienii îi taxează pe cei care le extrag petrolul cu 78%. România e Jefuită Noi îi taxăm cu 19.5% : 3,5% redevențe şi 16% impozitul pe profitul sifonat

Cum fac SEX rusoaicele, nemţoaicele sau italiencele. Clipul care a făcut senzaţie pe net VIDEO

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

ORGIE în toaleta unui club din România. Totul a fost filmat cu un telefon mobil. VIDEO

Oamenii de știință au reușit să controleze frecvența semnalelor trimise qubiților cuantici cu o precizie extraordinară controlând fiecare atom în parte

MOSTENIREA nestiuta a lui Ceausescu! America e SOCATA de ce a descoperit in Romania
ULTIMA ORA: Dusmanii tarii vor sa ascunda adevarul

Prezentatoare TV în sânii goi, după ce a fost trădată de rochie în direct VIDEO

Au făcut sex în restaurantul plin de oameni. Ce a făcut ospătăriţa când i-a văzut VIDEO XXX

PENIBIL. Cioloş - şoarecele lui Merkel şi al lui Soros a ajuns să se creadă dulău. Cioloş vrea să joace dur cu Marea Britanie şi s-o pună să plătească un preț mare pentru Brexit pentru ca nu cumva alții de frică să mai îndrăznească să iasă din UE

Tensiune în PNL. Vasile Blaga i-a convocat pe liderii din aripa PDL pentru a decide asupra susținerii lui Ludovic Orban

FRANTA - CROATIA LIVE VIDEO ONLINE STREAMING TVR FINALA CM 2018: 0-0. Cine va câştiga Cupa Mondială din Rusia?

Ceausescu ne-a lasat mostenire un stat la cheie: fara datorii, cu o industrie puternica, o agricultura irigata si intensiva. Noi in douazeci de ani am pierdut totul, inclusiv independenta statului

Accident GRAV la nuntă: 14 răniți după ce balustrada unei pensiuni din stațiunea Durău s-a prăbușit

TOP 10 cele mai bune ACTRIŢE PORNO din istorie. Sau cum sunt manipulați tinerii de mici FOTO

Cele mai bune filme erotice pe care le-ai ratat - Video

Două polițiste au oprit o altă femeie în trafic. Imediat după aceea au luat o MONEDĂ și i-au făcut un lucru scandalos. Acum, cele două agente au fost SUSPENDATE și își așteaptă pedeapsa

SĂRBĂTORI RELIGIOASE - 15 iulie

CITATUL ZILEI

Ce i-a făcut o blondă din Suceava iubitului ei. Clipul a devenit VIRAL. VIDEO

Metoda cu care afli câţi kilometri reali are o maşină second-hand. Samsarii nu mai au nicio şansă să te păcălească

O nouă ţeapă la înmatricularea de maşini în Bulgaria! Te trezeşti cu dosar penal și cu poliţia la uşă

Șefa diplomației europene, Federica Mogherini, a discutat la Tripoli despre cooperarea dintre UE și Libia

EFEMERIDE ASTRONOMICE - 15 iulie

Franța și Malta vor primi câte 50 de migranți, afirmă premierul italian, Giuseppe Conte

MANIPULAREA PRIN SEX. OANA ŞI VIOREL LIS, sex tape-ul care face înconjurul internetului. IMAGINI XXX

purtătorul de cuvânt Rețeaua lui George Soros lucrează la înlăturarea guvernelor de orientare națională

Un mort și trei răniți, într-un accident în județul Timiș, după ce mașina a ieșit de pe șosea. A fost solicitat elicopterul SMURD

Vladimir Putin a făcut un gest neobişnuit. Preşedintele Rusiei a fost văzut când se ducea la o femeie

Primul meci al sezonului, primul scandal cu arbitrii! Radu Petrescu, acuzat că a "ratat" penalty după penalty. Crăciunescu: "Sunt trei care nu s-au dat! Au fost greșeli mari". FOTO | Cele patru faze judecate greșit

Atenţie, şoferi, se schimbă legea! Ce trebuie să faci începând de luni

FRANTA - CROATIA LIVE ONLINE CM 2018: Probleme în lotul Croaţiei. Informaţii de ultimă oră despre finala CM 2018

EXCLUSIV | Ei sunt "finaliștii" cu care România se mândrește la Wimbledon. "Te ajută creta!". Cum arată o zi înainte de meciuri, rolul bicicletei și "feeling-ul" pe care ți-l dă uniforma de arbitru

Germania l avertizează pe Trump că și va pierde aliații n cazul unui acord unilateral cu Rusia

De la colții unui mistreț vânat de Năstase, la sticla de parfum "sexy" pentru Băsescu. Obiecte legate de politicieni care nu mai sunt în prim plan, vândute pe OLX | GALERIE FOTO

Microsoft a actualizat recent o aplicație din Windows care a stat neschimbată timp de 20 de ani

România și Ungaria, luptă aprigă pentru o gimnastă. Fata de aur, numită "vârful generației sale", a plecat, s-a răzgândit și acum a cerut să fie reprimită la Deva. Punctul de vedere al Federației și cuvântul greu al vecinilor

Filme porno şi orgii sexuale într-o instituţie publică din Timişoara

MIREASĂ prinsă de CAVALERUL de ONOARE în timp ce îşi înşela SOŢUL: Cine este BĂRBATUL ăsta? VIDEO

Veşti proaste pentru aceste zodii! Vor trece prin momente dificile în acest an

Leacul zilei, cu Lidia Fecioru: Toată lumea are aeastă plantă în casă, fără să ştie de efectele ei tămăduitoare

Când te bucuri și nu prea pentru golurile țării tale! O firmă de electrocasnice din Belgia s-a ales cu o "gaură" importantă după CM 2018. Pariul păgubos făcut la startul turneului

Şoferul din Bucureşti care nu a oprit la semnalele poliţiştilor şi a lovit cinci maşini a fost reţinut

Ilie Şerbănescu Vine criza: Stăpânul străin și vătafii interni pregătesc urgia asupra românilor

DRAMA ASTROLOGULUI MINERVA! DIAGNOSTICATĂ cu o BOALĂ CUMPLITĂ încă din COPILĂRIE!

Motivarea CNCD în cazul lui Klaus Iohannis. De ce a fost amendat preşedintele pentru discriminare

Nuntă încheiată tragic, la Durău. Mai multe persoane au căzut în gol, după prăbuşirea unei terase

Wimbledon: Mike Bryan și Jack Sock au cștigat proba de dublu

​SONDAJ Franța vs. Croația: Cine speri să cștige n finala CM 2018?

Luka Modric, "scos" din bătălia pentru Balonul de Aur de un nume important din fotbalul românesc: "Ce caută acolo cu cinci cornere bătute ca Bănel Nicoliță?" Marile minusuri ale mijlocașului

Tenis: Pentru mine la Wimbledon a fost doar începutul, spune Serena Williams

Efectul Sarri! Dă afară un titular din naționala Franței și-l oferă pe Morata la schimb pentru a-și îndeplini marea dorință

Theresa May afirmă că Donald Trump o sfătuise să acționeze în judecată UE în contextul Brexit

BREXITUL, pe cale de a fi abandonat. Theresa May, subminată de membrii Parlamentului în eforturile de a părăsi UE

Horoscopul banilor în săptămâna 16-22 iulie: trebuie să faci economii drastice pentru vacanţă

VIDEO Doi motocicliști s-au ciocnit n timpul paradei de Ziua Națională a Franței

A fost inventat aparatul care face radiografii 3D, color. Acesta folosește tehnologie CERN

Satul din România în care se cultivă anual peste un milion de trandafiri. Ce trebuie să știe cei care doresc să-și deschidă o astfel de afacere

Circulație oprită pe trei drumuri naționale, pe două se circulă ngreunat

LOTO, LOTO 6 DIN 49. REZULTATE LOTO 15 iulie, numere loto 15.08.2018. Report uriaş la Joker

MANIPULAREA PRIN SEX. IMAGINI EXPLICITE! Mădălina GHENEA, GOALĂ PUȘCĂ în SCENE de SEX SĂLBATIC in serialul "Familia Borgia - Adevar si Frica" | VIDEO 18+

BOMBA-SEXY Florentina Raiciu, păcălită pe internet: Blonda a făcut un show erotic pe Skype fără bani VIDEO

LIVE VIDEO Franţa - Croaţia ONLINE streaming pe TVR1 si TVR HD. Controverse la primul gol, nebunie la finala CM 2018

Legea Trădătoare Offshore a fost votata de Parlament într-o varianta cu un nou bacşiş. În esență însă Legea a rămas la fel de trădătoare față de interese românilor și față de nivele de impozitare a principalilor producători din UK, Norvegia și Danemarca

Deputatul Liviu Pleşoianu îi demască pe trădătorii de țară care pun la cale în aceste zile Legea Offshore-ului o lege prin care suntem jefuiți de resursele Noastre naturale.

Cum recunoașteți modelele străvechi de pe IE față de cele inventate recent. Cum recunoști o IE cu modele străvechi românești, de UN KITSCH.

Slabeste 10 kilograme în 14 zile! Trucul simplu, pe care-l poate încerca oricine

LIVE Text CM 2018, finala: Franța vs Croația (de la ora 18:00) / Echipele de start

Avarie AMJORĂ la o conductă de apă din Sibiu. Unsprezece localităţi au fost afectate

Plante medicinale interzise mămicilor care alăptează

Germanii văd în Trump cea mai mare ameninţare pentru pacea mondială

Roger Stone, fostul consilier al lui Trump, spune că probabil el este americanul citat n dosarul n care 12 agenți ai serviciilor secrete ruse au fost inculpați n SUA pentru ingerințe n alegerile prezidențiale din 2016

Maria Grapini: Păi, domnule Zegrean, dacă e recomandare cumva să fie obligație?

Noi detalii despre răpirea din Libia. Cine este românul luat ostatic de terorişti

Fșia Gaza: Mișcarea Hamas a anunțat ncheierea unui armistițiu cu Israelul

Au câştigat împreună o avere la Loto, dar nu vor să împartă câştigul

Theresa May cere susținere politică. Premierul britanic avertizează că altfel s-ar putea să nu mai fie "niciun Brexit"

Horoscop Mihai Voropchievici 16-22 iulie 2018. Săptămână futunoasă, nu forţa mâna norocului. Previziunile runelor

Novak Djokovic - Kevin Anderson, finala Wimbledon 2018, LIVE, de la ora 16:00. Al treilea duel dintre cei doi pe iarba londoneză: mizele unui ultim act de record, palmaresul direct și de ce se mai plânge, acum, sârbul

7 gustări sub 100 de calorii. Ce să mănânci ca să scapi de burtă

Atac al jihadiştilor Boko Haram. Cel puţin 23 de soldaţi sunt daţi dispăruţi

Făceau sex în maşină când au fost prinşi de poliţie şi amendaţi. Tânăra a contestat amenda în instanţă. Ce a urmat e fabulos!

Oficial sud-coreean: Redeschiderea Parcului Industrial Kaesong, cheia pentru cooperearea economică inter-coreeană

Șoferul care a lovit cinci mașini și a rănit două persoane n nordul Capitalei a fost arestat

FRANŢA-CROAŢIA LIVE VIDEO TVR. Finala CM 2018, astăzi aflăm noua regină a lumii

Rolls-Roys vrea să se lanseze n producția taxiurilor zburătoare

Germania îl avertizează pe Trump să nu încheie un acord unilateral cu Rusia în detrimentul aliaților occidentali

Rugăciune foarte puternică pentru găsirea sufletului pereche! O spui şi are efect imediat

Date ANM: Temperatura maximă absolută a lunii iulie: 44,3 grade Celsius, la Calafat, n 2007 / Cantitatea maximă de precipitații - 519,1 l/mp, n 1980

Ce înseamnă când îţi iese în cale o MIREASĂ. Vezi la ce să te aştepţi

Atentat terorist în centrul oraşului Kabul. Un atacator sinucigaş a omorât cel puţin şapte persoane

Schimbări importante în top 10 WTA! Cât de mare e avansul Simonei, unde "aterizează" Kerber după succesul de la Wimbledon și saltul incredibil al Serenei Williams

Afganistan: Număr record de civili uciși în primul semestru (ONU)

Bianca Drăguşanu s-a despărţit de Tristan Tate? Detaliul care i-a dat de gol

Președintele PMP: Ministrul Culturii trebuie să-și dea demisia; majoritatea PSD-ALDE a ngropat Centenarul

Peste 20 de persoane au avut nevoie de ngrijiri medicale, după ce au mncat la o nuntă din Brașov

Victor Slav, declaraţii BOMBĂ despre noua iubită: "Când te îndrăgosteşti..."

Turcia: Decrete prezidențiale pentru reorganizarea instituțiilor politice, militare și administrative

Seism puternic, de 5,4 pe Richter, în Yemen

Novak Djokovic și Kevin Anderson joacă duminică finala turneului de la Wimbledon

Detaliul decisiv pentru viitorul lui Bale, scos la lumină. Galezul, la un pas de un transfer de 119 milioane de euro

BRD Bucharest Open | Mihaela Buzărnescu, vedetă la "ziua copiilor"

A băut apă rece pe timpul caniculei. Incredibil ce i s-a întâmplat: medicii au fost chemaţi de urgenţă

Fotbal - CM 2018: Este un privilegiu să pregătesc echipa care a obținut cea mai importantă performanță (selecționerul Belgiei)

Finala Cupei Mondiale 2018 | Croația și Franța joacă duminică la Moscova. "Cocoșii" sunt din nou în finala mondială după 12 ani, iar croații au ajuns în ultimul act pentru prima dată

Aproape două treimi dintre germani îl consideră pe Trump o amenințare mai mare decât Putin

Armistițiu temporar între Israel și grupurile islamiste din Fâșia Gaza

Omagiu victimelor teroristului de la Nisa, după atentatul terorist de acum din 14 Iulie 2016

Drumuri naţionale oprite circulaţiei şi altele, cu trafic restricţionat

Horoscop 16 - 22 iulie Camelia Pătrăşcanu. Gemenii pun bani deoparte, Taurii îşi pot schimba locul de muncă

O fosilă găsită ntmplător - și ascunsă ani de zile - de un fermier francez pe terenul său s-a dovedit a fi craniul unui mastodont din Pirinei

Pe trei drumuri naționale traficul este oprit, iar pe două se circulă îngreunat, din cauza inundațiilor

Transformarea din Orientul Mijlociu: Cum au ajuns arabii să se îndepărteze de petrol și să investească zeci de miliarde de euro în tehnologie și energii regenerabile

Nigeria: 23 de soldați sunt dați dispăruți după un atac al jihadiștilor din Boko Haram

Trump, fascinat de regina Marii Britanii: "Este atât de frumoasă... Frumoasă şi în interior, şi în exterior..."

LIVE TEXT Finala Cupei Mondiale 2018: Franța - Croația


Pag.1 Pag.2 Pag.3 Pag.4 Pag.5 Pag.6 Pag.7
Pag.8 Pag.9 Pag.10 Pag.11 Pag.12 Pag.13 Pag.14 Pag.15

Nr. de articole la aceasta sectiune: 1727, afisate in 15 pagini.



ieri 17:25 New Look
ieri 02:45 CITATUL ZILEI