23:59
Comentarii Adauga Comentariu

VACCINAREA HPV DISTRUGE CREIERUL. STUDIU ȘTIINȚIFIC PUBLICAT ÎN REVISTA "NATURE": "Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis"

Din studiu: "În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare".

Figura 4: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Secțiunile din creierele șoarecilor vaccinați și cu Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 20 μm.



(traducere încă needitată complet)

Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis

Satoko Aratani, Hidetoshi Fujita, Yoshiyuki Kuroiwa, Chie Usui, Shumpei Yokota, Ikuro Nakamura, Kusuki Nishioka & Toshihiro Nakajima

Rapoarte științifice volumul 6 , Articol: 36943 (2016)

doi : 10.1038 / srep36943

Moartea celulelor în sistemul nervos Modele experimentale ale bolii

Primit: 05 mai 2016

Admis: 24 octombrie 2016

Publicat: 11 noiembrie 2016


RETRAS: 11 mai 2018 - (CENZURĂ: lobby-ul pharma a reușit retragerea studiului la doi ani de la acceptarea și publicarea lui).


Actualizat online 11 mai 2018

Abstract

Vaccinarea este cel mai puternic mod de a împiedica ființele umane să contracteze boli infecțioase, inclusiv viruși.

În cazul vaccinului împotriva papilomavirusului uman (HPV), a fost raportată și rămâne a fi atent verificată o entitate de boală neașteptat de nouă, sindromul neuroimunopatic asociat vaccinării HPV (HANS).

Pentru a elucida mecanismul HANS, am aplicat o strategie similară cu modelul encefalitei experimentale autoimune (EAE) - unul dintre cele mai populare modele animale folosite pentru a induce o schimbare imunologică maximă în sistemul nervos central. Surprinzător, șoarecii vaccinați cu toxină pertussis au prezentat fenotipuri neurologice care includ reacția scăzută a reflexului coapsei și a mobilității locomotivelor.

Analizele patologice au relevat afectarea regiunilor hipotalamice și circumventriculare din jurul celui de-al treilea ventricul, și aceste regiuni conțin celule endoteliale vasculare apoptotice. Aceste date au sugerat că donatorii vaccinați cu HPV care sunt susceptibili de vaccinul HPV ar putea dezvolta HANS sub anumite factori de mediu.

Aceste rezultate ne vor da noua perspectiva asupra modelului patologic murin al HANS si ne vor ajuta sa gasim o modalitate de tratare a pacientilor care sufera de HANS.

Introducere

Există o lungă istorie a luptei dintre ființele umane și bacteriile invazive și virușii. În secolul al 19-lea, Edward Jenner a dezvoltat cu succes și a administrat primul vaccin pentru oameni pentru a proteja împotriva variolei. În secolul al XX- lea, descoperirea penicilinei de către Walther Fleming a făcut posibilă uciderea directă a bacteriilor. Aceste două evoluții terapeutice ne-au oferit nu numai o modalitate de a preveni și trata bolile infecțioase, dar au dus, de asemenea, la o îmbunătățire extraordinară a bunăstării umane.

Cancerul de col uterin este cel mai frecvent tip de cancer la femei și este cancerul asociat cu cea mai mare rată de deces la femeile cu vârsta sub 44 de ani. Pentru că infecția cu virusul papilloma uman (HPV) este necesară pentru apariția cancerului de col uterin, protecția împotriva HPV este eficientă în evitarea bolii [1, 2]. Există 40 de tipuri de HPV care pot infecta epiteliul anogenital la om și 15 tipuri de virus sunt asociate cu cancerul de col uterin [3 , 4].

În general, vaccinul este destinat prevenirii bolilor infecțioase.

Pentru a preveni infecția cu HPV, s-au dezvoltat două vaccinuri profilactice;

Un vaccin tetravalent (Gardasil ® , Merck & Co, SUA) împotriva particulelor de virus L1-like la tipurile de HPV 6, 11, 16 și 185 ,

Şi un vaccin HPV bivalent (Cervarix ® ; Glaxo Smith Kline, Londra) împotriva tipurilor 16 și 18, care sunt considerate a fi cele mai frecvente dintre cele 15 tipuri asociate cu cancerul de col uterin.

Studiile clinice au evidențiat faptul că Gardasil și Cervarix sunt sigure și eficiente împotriva cancerului de col uterin 6 ; astfel, cele două vaccinuri au fost introduse pentru administrare în 2006, aproximativ 175 de milioane de doze fiind distribuite în întreaga lume de atunci.

Asemenea oglinzii lui Janus, totuși, imunizarea și vaccinarea au două aspecte diferite și se crede că unele tipuri de reacții imune puternice evocate conduc la reacții adverse semnificative.

De exemplu, câteva cazuri au determinat ca vaccinul să fie cauza reacțiilor gazdă anormale și disregulate, determinând febră sistemică, durere locală la locul injectării, deficit neurologic asemănător sindromului Guillain-Barré și simptome asemănătoare autoimune și curând.

Pentru a evoca o reacție imunologică completă și adecvată, vaccinurile includ adjuvantul de aluminiu în plus față de particulele asemănătoare virusului ca antigene.

Stimularea cronică a sistemului imunitar prin adjuvanți poate avea ca rezultat o boală autoimună caracterizată prin mialgie, artralgie, oboseală cronică [7, 8].

Pentru vaccinarea cu HPV, există două articole recente bine documentate recente.

Palmieri B. et al au raportat apariția unor sindroame severe somatoforme și disăutonomice după vaccinarea HPV 9 și Brint L. și colab . a descris asemenea debutul disautonomie după vaccinare tetravalent 10.

Ambele recenzii au indicat în mod clar prezența reacțiilor adverse unice asociate vaccinării cu HPV, inclusiv dureri de cap, oboseală, depresie, disfuncții cognitive, mișcări incontrolabile și involuntare și slăbiciune a membrelor.

Pentru aceste manifestări clinice, am prezentat aceste reacții ca sindrom neuroimunopatic asociat vaccinării cu papilomavirus uman (HANS) și cu criterii de diagnostic propuse. Sindromul HANS este considerat a fi format din patru domenii clinice;
(i) simptomele autonome, endocrine și inflamatorii;
(ii) simptome cognitive și emoționale;
(iii) simptome de hipersensibilitate de mediu și durere și
(iv) locomoție și simptome motorii [11], 12.

Mai multe studii clinice privind simptomele HANS au arătat, de asemenea, că vaccinurile HPV pot influența sistemul nervos central (CNS) [10 , 13 , 14 , 15].

În acest studiu, pentru a înțelege mai bine mecanismele moleculare ale HANS, încercăm mai întâi să stabilim un model animal al sindromului. Apoi am analizat leziunile patologice ale modelului HANS murin prin concentrarea asupra SNC.

Rezultate

Administrarea vaccinului HPV

Pentru a evalua efectele neurofiziologice ale vaccinului HPV, 48 de șoareci femele au fost fie imunizate cu Gardasil, fie cu o soluție salină tamponată cu fosfat (PBS), ca martor (Figura 1-a).

A fost administrată toxina pertussis (Ptx) ulterior vaccinării pentru a facilita accesul vaccinului la SNC prin modularea barierei hemato-encefalice (BBB) 16 .

Ca un control al encefalomielitei autoimune, s-a utilizat glicoproteina oligendendocitului mielin (MOG) 35-55 17.

Administrarea PBS sau Ptx nu a avut nici un efect (grupul 1, 2), iar perturbarea BBB de către Ptx în sine a fost confirmată că nu are efect.

Șoarecii din grupurile 5 și 6 aparțineau grupurilor experimentale de encefalită autoimună (EAE). Șoarecii din lotul 6 care au primit MOG și Ptx au prezentat cozi paralizate în 2 săptămâni și diferite simptome neurologice, cum ar fi pareza membrelor posterioare după 3 săptămâni.

Șoarecii din grupul 5, care au primit MOG fără administrare de toxine, au prezentat, de asemenea, simptome neurologice, care au avansat mai lent decât lotul 6 așa cum a fost raportat anterior la 18.

Șoarecii din grupurile 3 și 4 au aparținut grupurilor de tratament cu Gardasil. După o a treia injecție cu vaccin (4 săptămâni de la prima imunizare), trei din 16 șoareci din grupul 4, care au fost tratați cu Gardasil și Ptx, a prezentat o coadă cu tensiune redusă și o mișcare ce indica slăbiciune ( Fig. 1-b ). Incapacitatea motorie a fost evaluată prin utilizarea unui scor EAE (scară, 0-6) [19].

Deși severitatea simptomatică a variat, peste 50% dintre șoareci (12/21) au prezentat disfuncții motorii similare, inclusiv picăturile de coadă așa cum se arată în figura 1-a , pe parcursul studiului.

Doi dintre cei 14 șoareci cu imunizare secvențială prin administrarea vaccinului Gardasil în monoterapie (grupa 3) au prezentat disfuncții motorii mai ușoare în comparație cu grupul tratat combinat cu Gardasil și Ptx ( Figura 1-b, c).

Am confirmat comportamentul acestor șoareci prin testul cu o bară orizontală și prin testul ecranului inversat Kondziela 20 , 21 .

S-a observat o scădere semnificativă a coordonării motorii în grupul de tratament combinat cu Gardasil și Ptx, comparativ cu grupul de control.

Dimpotrivă, nu au existat diferențe în concentrația musculară dintre aceste grupuri, (Figura 1).

În total, aceste rezultate sugerează că administrarea combinată a vaccinului HPV și Ptx ar putea induce leziunea la SNC murinic.

Figura 1: Administrarea vaccinului HPV la șoareci. ( a ) combinarea reactivilor pentru injectare și evaluarea șoarecilor cu simptome neurologice, ( b ) fenotipul neurologic asociat cu vaccinarea și ( c ) scorul severității bolii.

Imagine de dimensiune completă

Analize patologice

Pentru investigarea ulterioară a leziunilor neuropatologice asociate vaccinării cu HPV, s-au efectuat analize histologice ale creierului. In general, grupurile nu au prezentat diferente in marimea sau greutatea creierului. Disecțiile cerebrale seriale au fost obținute la 12 săptămâni după prima imunizare și au fost colorate cu hematoxilină și eozină (H & E) și cu colorarea Klüver-Barrera (KB).

Colorația H & E a evidențiat ventriculele treia contractate la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx (figura 2-asuperior).

Pe de altă parte, șoarecii care au suferit EAE, arătând paralizia coapsei și a membrelor posterioare, nu păreau să-şi fi redus ventriculii treia.

În mod similar, tratamentul cu Ptx sau Gardasil în monoterapie nu a condus la stenoză treilea ventricular.

Diferențele morfologice nu au fost, de asemenea, detectate în cerebel, măduva spinării sau în cortex la șoareci tratați cu Gardasil în monoterapie, Ptx și Gardasil cu Ptx (Grupa 1, 2, 3 și 4).

Secțiunile secționale ale brațelor anterioare de la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx au fost colorate și au arătat că cel de-al treilea ventricul a fost remarcabil îngustat pe o gamă largă de brațe antebrale de la porțiunea anterioară la cea posterioară (figura 2-b).

Împreună, analizele noastre sugerează că tratamentul cu vaccin HPV ar putea afecta mărimea ventriculului și presiunea fluidului cerebrospinal (CSF).

Figura 2: Histologia creierului tratat cu vaccinul HPV. ( A ) H & E (superior) și KB (inferior) colorarea secțiunilor emisferelor din fiecare grupă ( b ) colorație H & E a secțiunilor coronale seriale ale encefalului de la șoarecii tratați cu vehicul ( de sus) și cu vaccin și Ptx (inferior) ( c ) KB colorarea secțiunilor coronale seriale. Scala bară, 2,5 μm ( d ) colorație H & E (superioară) și KB (inferioară) a secțiunilor periventriculare ale creierului de la șoareci cu deficite neurologice. Scară de bare, 500 μm.

Imagine de dimensiune completă

Pentru a confirma relația dintre efectele vaccinului HPV asupra funcției motorii și modificările histologice, diferențele din jurul celui de-al treilea ventricul au fost comparate între șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx.

În grupul tratat cu vaccin, cel de-al treilea ventricul a fost îngustat la toți șoarecii care prezintă picături de coadă.

În plus, gradul de îngustare a ventriculului treilea pare să corespundă gravității întreruperilor la tonul coapsei (figura 2-d). In colorație H & E a nucleelor hipotalamice paraventricular (PVN), nucleele dorsomedial hipotalamo (DMH) și nucleele arcuate de la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx, a indicat mai puține nuclee colorate decât la șoarecii din celelalte grupuri ( Fig. 2-b, d ). KB colorarea aceleiași structuri a evidențiat, de asemenea, o scădere a numărului de nuclee și a corpurilor Nissl (Figura 2-c, d ). În plus, am confirmat efectele asupra inflamației prin vaccinul HPV și Ptx. Nu a fost observată filtrarea limfocitelor în creierul anterior ( figura 2-b ).

Inducerea apoptozei în regiunile circumventriculare

Scăderea numărului de celule ne-a determinat să evaluăm asocierea dintre vaccinarea cu HPV și apoptoza din creierul anterior.

Pentru a face acest lucru, am efectuat testul TUNEL pe secțiuni ale creierului anterior. În secțiunile obținute de la animale tratate cu vehicul și Ptx, am găsit un număr limitat de celule TUNEL-pozitive cu nuclei marcate - ceea ce confirmă faptul că Ptx singur nu a induce apoptoza.

Între timp, au fost găsite mai multe celule TUNEL-pozitive în talamus și hipotalamusul obținut șoareci tratați cu Gardasil și Ptx ( Figura 3).

De fapt, s-au observat de șapte ori mai multe celule TUNEL pozitive la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx, în timp ce de patru ori mai multe celule apoptotice au fost găsite la șoareci tratați cu Gardasil în monoterapie decât celulele apoptotice la șoarecii vehicul (netratați).

În special, numărul celulelor marcate a fost mai mare în jurul celui de-al treilea ventricul și la vasele din PVN și DMH. Împreună, aceste date susțin o asociere între apoptoză și deteriorarea structurilor neuronale murine cauzate de administrarea vaccinului HPV și Ptx.

Figura 3: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 500 μm și 50 μm.

Imagine de dimensiune completă

Identificarea celulelor apoptotice

Apoi, am căutat să determinăm ce tipuri de celule au fost afectate de apoptoză.

Deoarece celulele apoptotice au fost observate în jurul vaselor, am marcat secțiuni folosind markeri pentru celule endoteliale vasculare, pericyte și astrocite. Celulele care exprimă CD31 au fost în concordanță cu celulele apoptotice legate la vase ( fig.4 ), în timp ce celulele care exprimă NG2- sau GFAP nu au fost colorate.

Rezultatele arată că vaccinul HPV a indus apoptoza celulelor endoteliale vasculare.

Figura 4: Imunohistochimia brațelor anterioare ale șoarecilor vaccinați. Secțiunile de momeală din șoarecii tratați cu vaccin și Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm.

Imagine de dimensiune completă

Neurotransmisia în regiunile circumventriculare

În cele din urmă, pentru o mai bună înțelegere a leziunilor neuronale în administrarea combinată a vaccinului HPV și a șoarecilor Ptx, am evaluat subtipurile interneuron în regiunile circumventriculare ( Fig.5 ). Ca rezultat al colorării imune, tirozina hidroxilaza (TH) a fost crescută în PVN, în special nucleele arcuite, la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx comparativ cu zona șoarecilor vehicul. Pe de altă parte, decarboxilaza acidului glutamic (GAD) 67 și acidul gama-aminobutiric (GABA) a fost scăzută în PVN. Expresia glutamin sintetazei, colina acetiltransferaza nu a fost schimbata. Aceste rezultate au arătat că neuronii dopaminergici au fost crescuți în nucleele arcuite, în timp ce neuronii GABAergici au fost reduse.

Figura 5: Imunofaringizarea interneuronului în regiunile circumventriculare. Secțiunile din creierul anterior din șoarecii tratați cu vaccin HPV și Ptx au fost colorați cu anti-TH, GAD67, cholină acetiltransferază (CA) și sintetază de glutamină (GS). Scară de bare, 500 μm.

Imagine de dimensiune completă

Discuţie

În acest studiu, am demonstrat că administrarea combinată a Gardasil și Ptx a indus o mișcare slabă a cozii și o mobilitate scăzută a locomotivelor. În plus, vaccinarea nu a avut efect asupra forței musculare. Observația neuropatologică relevă următoarele rezultate; (1) leziuni structurale la PVN, DMH, (2) atrezia ventriculară treia, (3) o creștere a apoptozei în jurul cavităților talamusului și hipotalamusului; celulele endoteliale vasculare din hipotalamus au fost afectate în mod special și (4) creșterea sintezei TH și scăderea sintezei GABA în nucleele arcuite.

Mobilitatea scăzută a locomotivelor șoarecilor din grupa 4 ( fig.1 ) a fost derivată din întreruperea rețelelor motorii hipotalamice, deoarece modificările patologice au fost discret localizate la structurile circumventriculare ( Fig.2 ), iar forța musculară a fost normală. Mai multe experimente pe animale au evidențiat importanța hipotalamusului pentru comandarea motorului și indică faptul că semnalele de comandă hipotalamice sunt responsabile în primul rând de conducerea locomoției și că pasul locomotor este mediat de hipotalamusul perimorfian și lateral 22 , 23 , 24 , locomoția și salturile scăpate sunt mediate de hipotalamus medial 25. Hipotalamusul are, de asemenea, un rol important în integrarea circuitelor neuronale pentru reglarea motorului, cu conexiuni la cortexul cingular al motorului în sistemul limbic, care se proiectează spre maduva spinării și nucleul roșu și au funcții premotor 26 . Deoarece mobilitatea scăzută a corpului asupra mișcărilor locomotive poate fi observată frecvent și la pacienții care suferă de HANS, am presupus că deficiențele locomotive atât în ​​fenotipul motor murin cât și în HANS uman sunt legate de zonele motorii hipotalamice perturbate.

Ventriculele cerebrale sunt umplute cu CSF și constituie o rețea de comunicare ce leagă cavitățile 27 . Datele noastre sugerează că vaccinarea împotriva HPV poate induce apoptoza celulelor endoteliale vasculare și poate perturba barierele BBB-CSF. Mai mult, îngustarea ventriculului ar fi putut fi cauzată de prăbușirea barierelor dintre creier și ventriculi, determinând CSF să curgă din creier 28 . CSF este important pentru menținerea homeostaziei creierului, iar îngustarea ventriculilor este adesea observată la pacienții care suferă de sindromul hipotensiunii intracraniene (ICH). Ca și mecanismul propus pentru îngustarea ventriculului observat în studiul actual, ICH este cauzată de scurgerea CSF și presiunea scăzută a CSF 29. Interesant, unele dintre aceste simptome clinice sunt experimentate de persoanele care suferă de HANS, cum ar fi cefaleea ortostatică, amețeli, rigiditate și așa mai departe 30 . Deși în prezent nu există informații patologice cu privire la HANS, ar putea fi important să se investigheze efectele vaccinării asupra funcției CSF și a caracteristicilor patologice din jurul celui de-al treilea ventricul în viitor.

În mod surprinzător, NK2 Homeobox 1 (Nkx2.1), cunoscut și ca șoareci cu deficit de factor de transcripție pentru factorul 1 de tiroidă (TTF-1), a fost stabilit și prezintă trăsături morfologice similare, inclusiv afectarea structurală a PVN și DMH și a atresia treilea ventricular la la șoarecii tratați cu vaccin în acest studiu. Nkx2.1 a fost identificat ca un factor de transcripție pentru factorii specifici tiroidieni 31 , 32 și a fost de asemenea stabilit ca un factor important pentru dezvoltarea creierului timpuriu 33 . Nkx2.1 este exprimată în regiunea ventrală a creierului prealabil 34 , 35. La șoarecii cu deficit de Nkx2.1, se observă anomalii în regiunile ventrale și medii ale hipotalamusului, cel de-al treilea ventricul este îngustat și nu ajunge la podeaua diencefalului 36 . Nkx2.1 este de asemenea cunoscută ca fiind exprimată în regiunea hipotalamică și în zonele periventriculare de la faza incipientă a dezvoltării la adulți 35 . În plus, se consideră că Nkx2.1 joacă roluri în pubertate și în funcția de reproducere și în schizofrenia 35 , 37 , 38 . La om, mutațiile genei Nkx2.1 pot provoca o corecție ereditară benignă (BHC) 39 , 40, o boală care afectează creierul, plămânii și tiroida. Pacienții cu această mutație suferă de o coreeană, o varietate de caracteristici neurologice, tremor, distonie axială și tulburări de mers 41 . Luând în considerare literatura de specialitate, datele noastre actuale sugerează că vaccinul HPV poate perturba calea de semnalizare mediată de Nkx2.1 care este exprimată în regiunea hipotalamică. Am studiat pe producerea neurotransmițătorilor , în scopul de a confirma corelarea fiziopatologic Nkx2.1, deoarece unele studii au indicat anomalii ale mai multor neurotransmitatori producției în Nkx 2.1 cu deficit-soareci in dezvoltarea timpurie 42 , și de asemenea la soareci adulti 35 , 38. Am găsit un fenotip similar al producției de neurotransmițători la șoarecii din grupa 4, inclusiv creșterea neuronilor dopaminergici și a neuronilor GABAergici redus ( Figura 5 ). Aceste rezultate pot explica simptomele sistemului endocrin în sindromul HANS.

Am arătat recent că funcțiile hipotalamusului sunt implicate în studiile clinice prin HANS. Testele funcției endocrine au arătat rezultatele care sugerează disfuncția hipotalamică. Tulburările HANS nu sunt de origine psihogenică, ci provin de la tulburările neuro-endocrinologice ale hipotalamusului și ale rețelelor sale limbice 15 . Mai mult, s-au acumulat dovezi care indică faptul că hipotalamusul este preocupat de anumite elemente de comportament / emoție 22 , 24 , 25 și important pentru reglarea durerii 43 , 44. PVN și DMH, afectate în modelul nostru HANS murin, controlează integral autonom, endocrin și joacă un rol important în întreținerea homeostatică pentru aceste funcții. Progresele recente în neuroștiință au evidențiat importanța PVN pentru plasticitatea sinaptică legată de stres în hipotalamusul 45. DMH și nucleul suprachiasmatic (SCN) au rolul lor în controlul circadian al somnului și, respectiv, în stimulatorul cardiac circadian, respectiv. Leziunile DMT excitotoxice reduc ritmul circadian al activității de veghe, hrănire și locomotor. Prin urmare, am presupus că focalizarea probabilă în HANS ar trebui să fie pe hipotalamus și organele circumventriculare din jurul ventriculului treilea, caracterizată de barieră hematoencefalică, întâmplător acele rapoarte clinice despre funcțiile hipotalamusului sunt în concordanță cu datele noastre folosind modelul de șoarece.

În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare. Este posibil să observăm că numai vaccinul HPV are ca rezultat un fenotip mai slab; mai degrabă, o tulpină de șoarece care este o tulpină hiper-susceptibilă în reacția sa imună (de exemplu, C57BL6) și adăugarea de Ptx care dăunează BBB sunt necesare. S-ar putea să existe fete hipersensibile la vaccinul HPV din cauza factorilor predispozanți neclare și / sau a evenimentelor concomitente de mediu care cauzează probabil o deteriorare a BBB (similar cu leziunea indusă de Ptx în studiul actual). O combinație variabilă a acestor factori poate duce la suferința individuală de la HANS. Sunt necesare analize suplimentare pentru verificarea acestei posibilități;

Metode aplicate pe Șoareci

Șoareci C57BL / 6 de sex feminin în vârstă de șase săptămâni au fost achiziționați de la Sankyo Laboratory (Japonia) și au fost utilizați pentru studiile de vaccinare. Șoarecii au fost ținute în condiții standard în instalația de animale de la Tokyo Medical University și au fost înzestrate cu hrană și apă ad libitum. Toate experimentele pe animale au fost aprobate de Comitetul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor instituționale al Universității Medicale din Tokyo (numerele de aprobare: s-27050 și s-28039) și au fost realizate în conformitate cu liniile directoare instituționale, științifice și naționale pentru experimentarea pe animale.

Reactivi și anticorpi

Antigenul pentru encefalomielita autoimună experimentală (EAE) și toxina pertussis (Ptx) au fost achiziționate de la Hook Laboratories, iar vaccinul HPV Gardasil a fost achiziționat de la MSD KK Următorii anticorpi au fost utilizați în acest studiu: anti-NG2, anti-GAD67 și anticorpi anti-tirozină hidroxilază de la Merck Millipore (Germania); anti-GFAP, CD31, anticholină acetiltransferază și sintetază anti-glutamină de la Abcam (Cambridge, UK); anticorp anti-GABA de la Sigma-Aldrich.

Vaccinare

Grupuri de șoareci femele C57BL / 6 în vârstă de 11 săptămâni au fost administrați intramuscular 100 pl de Gardasil sau soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) pentru un total de cinci ori. Ptx a fost administrat intraperitoneal 2 și 24 de ore după imunizare. Vaccinul Gardasil sau Ptx au fost administrate la intervale de 2 săptămâni sau respectiv 4 săptămâni. Ca martor, EAE a fost indusă cu glicoproteina oligonendrocyte mielină 35-55 (MOG 35-55 ) urmată de instrucțiunile producătorului (Hooke Laboratories, USA). Gravitatea bolii a fost evaluată în conformitate cu următoarele scoruri 19; 0, fără anomalie; 1 coada parțială; 2, pierderea tonicității cozii; 3, paralizie parțială a membrelor posterioare; 4, paralizie a membrelor posterioare complete; 5, paralizie anterioară sau moribundă; 6, moarte. A fost evaluat cel mai sever simptom al fiecărui șoarece pe parcursul studiului.

Histologie

Șoarecii au fost anesteziați și transcardiali perfundați cu PBS și formaldehidă 10% în PBS. Creierele au fost apoi îndepărtate, fixate în formaldehidă 10% și încorporate în parafină. Au fost obținute secțiuni de 5 micrometri și au fost deparafinate. Pentru analizele morfologice generale au fost utilizate colorații hematoxilină și eozină (H & E) și Klüver-Barrera (KB). Pentru imunohistochimie, am efectuat regăsirea antigenului prin încălzirea secțiunilor în tampon citrat și stingerea activității peroxidazei endogene prin incubarea secțiunilor în peroxid de hidrogen 3%. Secțiunile au fost blocate cu albumină serică de bovină 10% (BSA) în PBS și incubate cu anticorpi primari. După incubarea cu anticorpi secundari conjugați cu peroxidază de hrean (HRP), anticorpii legați au fost detectați cu 3,3-diaminobenzidină. Secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină,

Analiza TUNEL

Creierele de șoarece au fost fixate în formaldehidă 10% în PBS și au fost încorporate parafină. Secțiunile s-au tăiat la 5 pM și s-au deparafinizat utilizând o procedură standard. Testarea TUNEL a fost efectuată utilizând un kit de detectare a apoptozei in situ (Takara bio Inc. Japonia), secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină.

Sursa: Nature.com - Murine hypothalamic destruction with vascular cell apoptosis subsequent to combined administration of human papilloma virus vaccine and pertussis toxin


(Fluierul)


Linkul direct catre Petitie

CEREM NATIONALIZAREA TUTUROR RESURSELOR NATURALE ALE ROMANIEI ! - Initiativa Legislativa care are nevoie de 500.000 de semnaturi - Semneaza si tu !

Comentarii:


Adauga Comentariu



Citiți și cele mai căutate articole de pe Fluierul:

Un Securistoid Progresist pe nume Iulian Fota se ia de MIHAI EMINESCU. Eminescu era un "ANTI-OCCIDENTAL" pentru că era finanțat de "Moșieri, și aceștia îl finanțau pe Eminescu ca să desființeze toate ideile venite dinspre Europa prin pașoptism"

ILIESCU JUDECAT PENTRU SÂNGELE VĂRSAT. Dezvăluiri ȘOCANTE din Dosarul MINERIADEI. Iliescu a APROBAT distribuirea MUNIȚIEI DE RĂZBOI. Chițac a AVIZAT FOLOSIREA acesteia

Vaccinurile împing agenți patogeni să evolueze și să devină din ce în ce mai periculoși

Active News - Cristian Dogaru - "Cu care Licurici ne va fi mai bine?" Trump-Netanyahu sau Federalista-UE? Autorul "nu vede niciun motiv de bucurie dacă schimbăm Stăpânul (Progresist)". Este o concluzie Fundamental Greșită pentru Soarta Țării Noastre

Comisia Europeană, acuzată că dă dovadă de lipsă de transparenţă privind viitorul buget al UE

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

Suedia: Partidul Democrații Suedezi (antiimigrație), scor record înaintea alegerilor din septembrie (sondaj)

SEX TAPE made in Romania: 4 vedete autohtone FILMATE făcând perversităţi VIDEO

ORGIE în toaleta unui club din România. Totul a fost filmat cu un telefon mobil. VIDEO

În sfârșit Progresista Merkel, a zis-o pe ȘLEAU: Angela Merkel: Germania are un interes strategic în a avea relații bune cu Rusia. Gazoductul NorthStream 2 făcut exclusiv între Germania și Rusia merge înainte

MOSTENIREA nestiuta a lui Ceausescu! America e SOCATA de ce a descoperit in Romania
ULTIMA ORA: Dusmanii tarii vor sa ascunda adevarul

Noile vaccinuri vor altera în mod permanent ADN-ul uman. Nimeni nu va mai şti exact decât producătorii lor ce anume vor modifica vaccinurile în ADN-ul fiecărei persoane.

Dobânda de Referință a lui Isărescu, care a impus pe rând 3 recorduri mondiale în acest an, a UMFLAT pe spinarea românilor profiturile băncilor străine din România cu pâna la 120%

POSTUL LĂSAT DE LA DUMNEZEU, NE REGENEREAZĂ CELULELE ȘI NE VINDECĂ TUMORILE. Studiu Științific "Care este efectul Postului asupra regenerării celulelor stem din intestin. Descoperirea științifică făcută recent."

Prezentatoare TV în sânii goi, după ce a fost trădată de rochie în direct VIDEO

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

O firmă înființată și, mai apoi, coordonată de Vasile Dâncu și-a adjudecat o licitație de la ANCOM fix pe 3.552.000 de lei, la mijlocul lunii mai. La mijlocul lunii martie Dâncu și Grindeanu, actualul sef al ANCOM, stăteau la un șpriț împreună.

Facebook le cere nuduri utilizatorilor săi

VIDEO Imaginile carnagiului cu nouă români morți în Ungaria, filmate de un șofer aflat în spatele camionului

Încă o lovitură primită de Eugenie Bouchard, una dintre bombele sexy ale tenisului feminin

QMagazine invocă Surse din Parchetul General care spun că Procurorul Mircea Negulescu este martor sub acoperire și a scris deja 50 de pagini devastatoare despre Laura Codruța Kovesi.

Inchiziția, instrumentul de teroare al Evului Mediu. Lucruri mai puțin știute despre crimele în numele credinței

SĂRBĂTORI RELIGIOASE - 24 mai

Cum fac SEX rusoaicele, nemţoaicele sau italiencele. Clipul care a făcut senzaţie pe net VIDEO

Horoscop zilnic JOI 24 mai 2018. Ţie ce îţi aduce Soarele în trigon cu Marte azi?

O revistă franceză l-a prezentat pe Mark Zuckerberg în pielea lui Napoleon

CITATUL ZILEI

Pentagonul a retras invitația trimisă Chinei de a participa la exercițiile militare RIMPAC

ONU suspendă sancțiuni pentru a permite oficialilor nord-coreeni să participe la summitul din Singapore

Bancul zilei: Război n Scoția

De ce e important Pilonul II de pensii private

Povestea fascinantă a fostului comandant al Aeronauticii Regale Române: de la pilot de avion la scriitor și traducător

Cel puțin patru oameni au murit și alți 15 au fost răniți în urma unui atac comis în Bagdad

Singurul refugiu al Regelui Ferdinand în vara lui 1915. Monarhul voia să ia parte la evenimente majore din istorie

Delicatesă cu hribi. Rețeta unei ciorbe aromate pe care trebuie neapărat s-o încerci

Cum au fost tratați liderii comuniști reținuți la Revoluția din 1989: "Detenția a fost mai degrabă un sejur plăcut"

Presa rusă: După Rumen Radev, se duce și Boiko Borisov la Putin/ Bulgaria a distrus trei proiecte comune majore. Ce garanție avem că nu va face la fel?

Cum l-a pus Cosmin Contra la punct pe Hagi după afirmațiile incendiare ale celui mai bun fotbalist din toate timpurile

Ilie Năstase râde din nou de Serena Williams: "N-are timp să slăbească!"

Vladimir Putin va efectua o vizită oficială în China

Politic show: ​Tăriceanu: E dreptul PNL să dezinformeze cetățenii; Proasta satului și trufia europeană; Ce a negociat Tăriceanu cu Dragnea și Dăncilă la Guvern?

Business report:Un nou proiect fantezist, Centura Capitalei la nivel de autostradă; Un gigant de telefonie mobilă, amendat cu o sumă uriașă pentru că și-a bătut joc de milioane de romni; Romnia importă energie electrică n orele de vrf.

SUA au retras o invitație adresată Chinei de a participa la exerciții militare navale în Pacific

Are lumea la picioare! Poziție fruntașă ocupată de Simona Halep în topul celor mai influente sportive din lume

Serghei Lavrov va efectua o vizită în Coreea de Nord

Giuseppe Conte, un jurist necunoscut, desemnat să formeze Guvernul italian

Președintele Iohannis vizitează uzina Automobile Dacia și participă, la Pitești, la o dezbatere privind instustria auto

Președintele Klaus Iohannis va vizita astăzi uzina Automobile Dacia de la Mioveni

O fostă majoretă a făcut SEX cu un elev de 15 ani! Filmul XXX a ajuns pe INTERNET. VIDEO

Dragnea îl acuză pe Iohannis: "A stat la masă cu un stat, Kosovo, care încă nu e recunoscut de România". Numai atât? Iohannis a relocat populații străine pe teritoriul României la cererea lui Merkel și a lui Juncker încălcând Constituția României

Au făcut sex în restaurantul plin de oameni. Ce a făcut ospătăriţa când i-a văzut VIDEO XXX

Ultimele postările ale lui Donald Trump în lupta sa cu Rețeaua Progresistă care controlează FBI-ul și Departamentul de Justiție din SUA - LIVE TEXT

Coreea de Nord amenință din nou cu anularea summitului Kim-Trump

Eurobarometru PE: sprijinul față de UE este la un nivel record, cu un an naintea alegerilor europene din luna mai 2019/ Romnii sunt printre cei mai optimiști n privința viitorului UE

Subiectele zilei: Marile contracte pentru nzestrarea armatei hrănesc o clientelă politică ; Fabuloasa poveste a romnului ajuns n SUA n anii '80, care și-a clădit imperiul prin invenții; Handbal cu bani publici. Salarii de lux, obiective ratate;

DECIZIA care îl face pe Trump să fiarbă de FURIE. Are mâinile legate, nu mai poate face NIMIC

Donald Trump va anunța săptămâna viitoare dacă întâlnirea cu Kim Jong-un va avea loc la 12 iunie

Divorțul la notar: în ce condiții se poate realiza, cât durează și ce documente necesită. Explicațiile specialistului

VIDEO Experiment. Reacțiile stupefiante ale unor câini când stăpânii lor sunt în pericol

Britanicii se grăbesc să devină cetățeni germani nainte ca Marea Britanie să se retragă din Uniunea Europeană

Evaluarea Națională: Elevii de clasa a VI-a susțin joi proba la Matematică și Științele naturii

EFEMERIDE ASTRONOMICE - 24 mai

Evaluarea Națională: Elevii de clasa a VI-a susțin joi proba la Matematică și Științele Naturii

Coreea de Nord amenință din nou cu anularea summitului Kim-Trump

Comisia Europeană recomandă renunțarea la procedura împotriva Franței pentru deficit excesiv

Motivul pentru care Bitcoin ar putea ajunge neprofitabil până la sfârșitul anului 2018. Procesul de minare devine cumplit de costisitor

Gest de mare sportivă! Ce va face Karolina Pliskova după ce și-a ieșit din minți la turneul de la Roma

Iranul impune condiții pentru a rămâne în acordul nuclear

Coreea de Nord ameninţă din nou cu anularea summitului Kim-Trump. Serghei Lavrov va efectua o vizită la Phenian

Cum poţi câştiga bani în timp ce te relaxezi. Poţi face şi 120 de dolari pe ZI

Giuseppe Conte, un jurist necunoscut, desemnat să formeze Guvernul italian

Vladirmir Drăghia, câştigător Exatlon 2018, primele declaraţii: "Nu am âştigat eu..."

Avionul Egyptair prăbuşit: Analiza uneia din cutiile negre arată că s-a pronunţat cuvântul "foc"

Un bărbat a murit după ce a căzut dintr-o barcă în apropierea falezei din Tulcea

Roland Garros | Cine vine special să "tragă" adversarii pentru Halep și Nadal

RUGĂCIUNI pentru Vladimir Drăghia. CLIPE DE COŞMAR înainte să câştige EXATLON: "Am crezut ca mor de vreo doua ori!"

Vedetă din lumea modei de la noi, găsită moartă, cu trupul zdrobit. Avea 28 DE ANI: primele ipoteze ale ANCHETATORILOR

CASTIGATOR EXATLON 2018: Carmen Harra a dezvăluit cine va lua marele premiu. Finala Exatlon are loc miercuri seară

Fostul primar din Calafat și bulibașa romilor din Drăgănești-Olt, condamnați definitiv la nchisoare cu executare

Guvernul va modifica în şedinţa de joi Legea achiziţiilor publice

Preşedintele Italiei i-a dat mandat de premier lui Giuseppe Conte

Horoscop weekend 25-27 mai 2018. Luna aproape plină în Balanţă şi în Scorpion amestecă totul!

Alexandra Dulgheru, în turul secund al calificărilor la Roland Garros

FOTO | Iniesta a anunțat unde va juca din sezonul viitor! Mesajul postat de Don Andres pe Instagram. UPDATE | Presa internațională a aflat numele echipei cu care va semna

Facebook cere utilizatorilor fotografii nud

BBC: Avocatul lui Trump Michael Cohen, plătit de Ucraina să aranjeze discuții la Casa Albă

​Fetița care a născut o fetiță sau povestea nespusă a mamelor minore - reportaj din Sălaj

Rețea de trafic de migranți, destructurată. 5.000 de euro plătiți pentru a ajunge în vestul Europei

Procurorul Negulescu: Nu am făcut niciun denunț mpotriva Codruței Koveși/ Nu inteleg de ce ministrul Justitiei a intrat n acest joc al dezinformării

Razii la afaceriștii cu lemne: polițiștii au  confiscat peste 80 de metri cubi

Consiliul Concurenței despre modificările propuse la Legea taximetriei care ar putea scoate din piață Star Taxi, Clever Taxi, Uber: Dezvoltarea unor astfel de aplicații contribuie la creșterea gradului de concurență n piață

Vastă reţea de trafic de migranţi, destructurată la Timişoara. Cum funcţiona grupul şi cum se tranzita România

MAE: Toate cele nouă persoane care au murit n accidentul de microbuz din Ungaria aveau cetățenie romnă

TOP 10 cele mai bune ACTRIŢE PORNO din istorie. Sau cum sunt manipulați tinerii de mici FOTO

Elevii și preșcolarii din cinci sate de oieri din Munții Sebeșului au intrat de luni, 22 mai, în vacanța de vară. Ei îşi vor însoți părinții în transhumanță pentru „văratul” oilor la munte.

Horoscop iunie 2018: Situaţia financiară a acestor nativi va scăpa de sub control. Îi aşteaptă zile grele

MIREASĂ prinsă de CAVALERUL de ONOARE în timp ce îşi înşela SOŢUL: Cine este BĂRBATUL ăsta? VIDEO

Un vis, un trofeu de 10 kilograme și calculele luptei în patru pentru numărul #1 mondial. Reperele cursei cu istoria a Simonei Halep la Roland Garros: de la 1 la 10

Ion Ţiriac, afacere CONTROVERSATĂ. Care este legătura cu un fost PREMIER asociat cu MAFIA

Dragnea: Doi foști premieri ai partidului au atitudine de șobolan. Rod puțin, dar nu se dărmă casa

Gigi Becali a decis! Antrenor BOMBĂ la FCSB

Liviu Dragnea, interviu pentru Reuters: Contribuţiile la fondurile private de pensii ar putea deveni opţionale

Ciclism: Turul Belgiei - Andre Greipel, învingător în prima etapă

Deputatul Daniel Olteanu şi-a anunţat demisia din PNL

FRF, prima decizie după ce Florin Talpan a cerut dezafilierea FCSB. Ce se întâmplă cu clubul lui Gigi Becali

Progresiștii atacă Homeopatia și cer Desființarea ei. Demni urmași ai bolșevicilor, progresiștii se ocupă Să facă Dosare Penale ca Să-și bage Adversarii la Zdup, Să cenzureze cu Liste Negre Presa Conservatoare, Să impună Măsuri Cu Forța și să Interzică

Evaluarea Națională. Elevii din clasa a VI-a susțin, joi, ultima probă

Vladimir Putin va efectua o vizită oficială în China

Percheziții la persoane bănuite de furturi din tiruri

Angela Merkel vizitează China n această săptămnă. Pentru a unsprezecea oară de cnd este cancelar

Agenția de Mediu avertizează Anglia că trebuie luate măsuri urgente pentru reducerea consumului si a pierderilor de apă

Zeci de polițiști, jandarmi și localnici au căutat un bătrân dispărut la cules de ciuperci. Bărbatul nu a fost găsit

Accident la petrecerea de absolvire a clasei a XII-a. Două maşini s-au ciocnit în parcare VIDEO

Explozie DEVASTATOARE la un depozit de artificii soldată cu cel puţin un mort şi 26 de răniţi. Proprietarul firmei a fost arestat

EXATLON şi-a desemnat marele câştigător. Ce va face acesta cu premiul de 100.000 de euro

Bratu, mulțumit de copiii lui Dinamo: "Vă promit că o să facem față în play-off!". "Mitraliera" a anunțat plecarea unui om de bază: "Îi mulțumim pentru plusul de valoare pe care l-a adus"

I-au luat Poliția și ANAF că făceau și vindeau produse contrafăcute pe internet

Mutu, gata să meargă și în Liga 2 cu FC Voluntari: "Construim o echipă nouă și revenim! Știam unde vin. Atât putem în momentul ăsta"

Talpan a cerut oficial dezafilierea FCSB şi excluderea din cupele europene. Cere ca Steaua să fie acceptată în Liga 1

Talpan a cerut oficial FRF dezafilierea FCSB și ca dreptul să joace n Liga I să-i revină CSA Steaua


Pag.1 Pag.2 Pag.3 Pag.4 Pag.5 Pag.6 Pag.7

Nr. de articole la aceasta sectiune: 822, afisate in 7 pagini.



ieri 18:42 ȘTIRILE MEDIAFAX
ieri 02:39 CITATUL ZILEI