23:59
Comentarii Adauga Comentariu

VACCINAREA HPV DISTRUGE CREIERUL. STUDIU ȘTIINȚIFIC PUBLICAT ÎN REVISTA "NATURE": "Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis"

Din studiu: "În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare".

Figura 4: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Secțiunile din creierele șoarecilor vaccinați și cu Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 20 μm.



(traducere încă needitată complet)

Distrugerea hipotalamică murină cu apoptoză de celule vasculare după administrarea combinată a vaccinului împotriva papilomavirusului uman și a toxinei pertussis

Satoko Aratani, Hidetoshi Fujita, Yoshiyuki Kuroiwa, Chie Usui, Shumpei Yokota, Ikuro Nakamura, Kusuki Nishioka & Toshihiro Nakajima

Rapoarte științifice volumul 6 , Articol: 36943 (2016)

doi : 10.1038 / srep36943

Moartea celulelor în sistemul nervos Modele experimentale ale bolii

Primit: 05 mai 2016

Admis: 24 octombrie 2016

Publicat: 11 noiembrie 2016


RETRAS: 11 mai 2018 - (CENZURĂ: lobby-ul pharma a reușit retragerea studiului la doi ani de la acceptarea și publicarea lui).


Actualizat online 11 mai 2018

Abstract

Vaccinarea este cel mai puternic mod de a împiedica ființele umane să contracteze boli infecțioase, inclusiv viruși.

În cazul vaccinului împotriva papilomavirusului uman (HPV), a fost raportată și rămâne a fi atent verificată o entitate de boală neașteptat de nouă, sindromul neuroimunopatic asociat vaccinării HPV (HANS).

Pentru a elucida mecanismul HANS, am aplicat o strategie similară cu modelul encefalitei experimentale autoimune (EAE) - unul dintre cele mai populare modele animale folosite pentru a induce o schimbare imunologică maximă în sistemul nervos central. Surprinzător, șoarecii vaccinați cu toxină pertussis au prezentat fenotipuri neurologice care includ reacția scăzută a reflexului coapsei și a mobilității locomotivelor.

Analizele patologice au relevat afectarea regiunilor hipotalamice și circumventriculare din jurul celui de-al treilea ventricul, și aceste regiuni conțin celule endoteliale vasculare apoptotice. Aceste date au sugerat că donatorii vaccinați cu HPV care sunt susceptibili de vaccinul HPV ar putea dezvolta HANS sub anumite factori de mediu.

Aceste rezultate ne vor da noua perspectiva asupra modelului patologic murin al HANS si ne vor ajuta sa gasim o modalitate de tratare a pacientilor care sufera de HANS.

Introducere

Există o lungă istorie a luptei dintre ființele umane și bacteriile invazive și virușii. În secolul al 19-lea, Edward Jenner a dezvoltat cu succes și a administrat primul vaccin pentru oameni pentru a proteja împotriva variolei. În secolul al XX- lea, descoperirea penicilinei de către Walther Fleming a făcut posibilă uciderea directă a bacteriilor. Aceste două evoluții terapeutice ne-au oferit nu numai o modalitate de a preveni și trata bolile infecțioase, dar au dus, de asemenea, la o îmbunătățire extraordinară a bunăstării umane.

Cancerul de col uterin este cel mai frecvent tip de cancer la femei și este cancerul asociat cu cea mai mare rată de deces la femeile cu vârsta sub 44 de ani. Pentru că infecția cu virusul papilloma uman (HPV) este necesară pentru apariția cancerului de col uterin, protecția împotriva HPV este eficientă în evitarea bolii [1, 2]. Există 40 de tipuri de HPV care pot infecta epiteliul anogenital la om și 15 tipuri de virus sunt asociate cu cancerul de col uterin [3 , 4].

În general, vaccinul este destinat prevenirii bolilor infecțioase.

Pentru a preveni infecția cu HPV, s-au dezvoltat două vaccinuri profilactice;

Un vaccin tetravalent (Gardasil ® , Merck & Co, SUA) împotriva particulelor de virus L1-like la tipurile de HPV 6, 11, 16 și 185 ,

Şi un vaccin HPV bivalent (Cervarix ® ; Glaxo Smith Kline, Londra) împotriva tipurilor 16 și 18, care sunt considerate a fi cele mai frecvente dintre cele 15 tipuri asociate cu cancerul de col uterin.

Studiile clinice au evidențiat faptul că Gardasil și Cervarix sunt sigure și eficiente împotriva cancerului de col uterin 6 ; astfel, cele două vaccinuri au fost introduse pentru administrare în 2006, aproximativ 175 de milioane de doze fiind distribuite în întreaga lume de atunci.

Asemenea oglinzii lui Janus, totuși, imunizarea și vaccinarea au două aspecte diferite și se crede că unele tipuri de reacții imune puternice evocate conduc la reacții adverse semnificative.

De exemplu, câteva cazuri au determinat ca vaccinul să fie cauza reacțiilor gazdă anormale și disregulate, determinând febră sistemică, durere locală la locul injectării, deficit neurologic asemănător sindromului Guillain-Barré și simptome asemănătoare autoimune și curând.

Pentru a evoca o reacție imunologică completă și adecvată, vaccinurile includ adjuvantul de aluminiu în plus față de particulele asemănătoare virusului ca antigene.

Stimularea cronică a sistemului imunitar prin adjuvanți poate avea ca rezultat o boală autoimună caracterizată prin mialgie, artralgie, oboseală cronică [7, 8].

Pentru vaccinarea cu HPV, există două articole recente bine documentate recente.

Palmieri B. et al au raportat apariția unor sindroame severe somatoforme și disăutonomice după vaccinarea HPV 9 și Brint L. și colab . a descris asemenea debutul disautonomie după vaccinare tetravalent 10.

Ambele recenzii au indicat în mod clar prezența reacțiilor adverse unice asociate vaccinării cu HPV, inclusiv dureri de cap, oboseală, depresie, disfuncții cognitive, mișcări incontrolabile și involuntare și slăbiciune a membrelor.

Pentru aceste manifestări clinice, am prezentat aceste reacții ca sindrom neuroimunopatic asociat vaccinării cu papilomavirus uman (HANS) și cu criterii de diagnostic propuse. Sindromul HANS este considerat a fi format din patru domenii clinice;
(i) simptomele autonome, endocrine și inflamatorii;
(ii) simptome cognitive și emoționale;
(iii) simptome de hipersensibilitate de mediu și durere și
(iv) locomoție și simptome motorii [11], 12.

Mai multe studii clinice privind simptomele HANS au arătat, de asemenea, că vaccinurile HPV pot influența sistemul nervos central (CNS) [10 , 13 , 14 , 15].

În acest studiu, pentru a înțelege mai bine mecanismele moleculare ale HANS, încercăm mai întâi să stabilim un model animal al sindromului. Apoi am analizat leziunile patologice ale modelului HANS murin prin concentrarea asupra SNC.

Rezultate

Administrarea vaccinului HPV

Pentru a evalua efectele neurofiziologice ale vaccinului HPV, 48 de șoareci femele au fost fie imunizate cu Gardasil, fie cu o soluție salină tamponată cu fosfat (PBS), ca martor (Figura 1-a).

A fost administrată toxina pertussis (Ptx) ulterior vaccinării pentru a facilita accesul vaccinului la SNC prin modularea barierei hemato-encefalice (BBB) 16 .

Ca un control al encefalomielitei autoimune, s-a utilizat glicoproteina oligendendocitului mielin (MOG) 35-55 17.

Administrarea PBS sau Ptx nu a avut nici un efect (grupul 1, 2), iar perturbarea BBB de către Ptx în sine a fost confirmată că nu are efect.

Șoarecii din grupurile 5 și 6 aparțineau grupurilor experimentale de encefalită autoimună (EAE). Șoarecii din lotul 6 care au primit MOG și Ptx au prezentat cozi paralizate în 2 săptămâni și diferite simptome neurologice, cum ar fi pareza membrelor posterioare după 3 săptămâni.

Șoarecii din grupul 5, care au primit MOG fără administrare de toxine, au prezentat, de asemenea, simptome neurologice, care au avansat mai lent decât lotul 6 așa cum a fost raportat anterior la 18.

Șoarecii din grupurile 3 și 4 au aparținut grupurilor de tratament cu Gardasil. După o a treia injecție cu vaccin (4 săptămâni de la prima imunizare), trei din 16 șoareci din grupul 4, care au fost tratați cu Gardasil și Ptx, a prezentat o coadă cu tensiune redusă și o mișcare ce indica slăbiciune ( Fig. 1-b ). Incapacitatea motorie a fost evaluată prin utilizarea unui scor EAE (scară, 0-6) [19].

Deși severitatea simptomatică a variat, peste 50% dintre șoareci (12/21) au prezentat disfuncții motorii similare, inclusiv picăturile de coadă așa cum se arată în figura 1-a , pe parcursul studiului.

Doi dintre cei 14 șoareci cu imunizare secvențială prin administrarea vaccinului Gardasil în monoterapie (grupa 3) au prezentat disfuncții motorii mai ușoare în comparație cu grupul tratat combinat cu Gardasil și Ptx ( Figura 1-b, c).

Am confirmat comportamentul acestor șoareci prin testul cu o bară orizontală și prin testul ecranului inversat Kondziela 20 , 21 .

S-a observat o scădere semnificativă a coordonării motorii în grupul de tratament combinat cu Gardasil și Ptx, comparativ cu grupul de control.

Dimpotrivă, nu au existat diferențe în concentrația musculară dintre aceste grupuri, (Figura 1).

În total, aceste rezultate sugerează că administrarea combinată a vaccinului HPV și Ptx ar putea induce leziunea la SNC murinic.

Figura 1: Administrarea vaccinului HPV la șoareci. ( a ) combinarea reactivilor pentru injectare și evaluarea șoarecilor cu simptome neurologice, ( b ) fenotipul neurologic asociat cu vaccinarea și ( c ) scorul severității bolii.

Imagine de dimensiune completă

Analize patologice

Pentru investigarea ulterioară a leziunilor neuropatologice asociate vaccinării cu HPV, s-au efectuat analize histologice ale creierului. In general, grupurile nu au prezentat diferente in marimea sau greutatea creierului. Disecțiile cerebrale seriale au fost obținute la 12 săptămâni după prima imunizare și au fost colorate cu hematoxilină și eozină (H & E) și cu colorarea Klüver-Barrera (KB).

Colorația H & E a evidențiat ventriculele treia contractate la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx (figura 2-asuperior).

Pe de altă parte, șoarecii care au suferit EAE, arătând paralizia coapsei și a membrelor posterioare, nu păreau să-şi fi redus ventriculii treia.

În mod similar, tratamentul cu Ptx sau Gardasil în monoterapie nu a condus la stenoză treilea ventricular.

Diferențele morfologice nu au fost, de asemenea, detectate în cerebel, măduva spinării sau în cortex la șoareci tratați cu Gardasil în monoterapie, Ptx și Gardasil cu Ptx (Grupa 1, 2, 3 și 4).

Secțiunile secționale ale brațelor anterioare de la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx au fost colorate și au arătat că cel de-al treilea ventricul a fost remarcabil îngustat pe o gamă largă de brațe antebrale de la porțiunea anterioară la cea posterioară (figura 2-b).

Împreună, analizele noastre sugerează că tratamentul cu vaccin HPV ar putea afecta mărimea ventriculului și presiunea fluidului cerebrospinal (CSF).

Figura 2: Histologia creierului tratat cu vaccinul HPV. ( A ) H & E (superior) și KB (inferior) colorarea secțiunilor emisferelor din fiecare grupă ( b ) colorație H & E a secțiunilor coronale seriale ale encefalului de la șoarecii tratați cu vehicul ( de sus) și cu vaccin și Ptx (inferior) ( c ) KB colorarea secțiunilor coronale seriale. Scala bară, 2,5 μm ( d ) colorație H & E (superioară) și KB (inferioară) a secțiunilor periventriculare ale creierului de la șoareci cu deficite neurologice. Scară de bare, 500 μm.

Imagine de dimensiune completă

Pentru a confirma relația dintre efectele vaccinului HPV asupra funcției motorii și modificările histologice, diferențele din jurul celui de-al treilea ventricul au fost comparate între șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx.

În grupul tratat cu vaccin, cel de-al treilea ventricul a fost îngustat la toți șoarecii care prezintă picături de coadă.

În plus, gradul de îngustare a ventriculului treilea pare să corespundă gravității întreruperilor la tonul coapsei (figura 2-d). In colorație H & E a nucleelor hipotalamice paraventricular (PVN), nucleele dorsomedial hipotalamo (DMH) și nucleele arcuate de la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx, a indicat mai puține nuclee colorate decât la șoarecii din celelalte grupuri ( Fig. 2-b, d ). KB colorarea aceleiași structuri a evidențiat, de asemenea, o scădere a numărului de nuclee și a corpurilor Nissl (Figura 2-c, d ). În plus, am confirmat efectele asupra inflamației prin vaccinul HPV și Ptx. Nu a fost observată filtrarea limfocitelor în creierul anterior ( figura 2-b ).

Inducerea apoptozei în regiunile circumventriculare

Scăderea numărului de celule ne-a determinat să evaluăm asocierea dintre vaccinarea cu HPV și apoptoza din creierul anterior.

Pentru a face acest lucru, am efectuat testul TUNEL pe secțiuni ale creierului anterior. În secțiunile obținute de la animale tratate cu vehicul și Ptx, am găsit un număr limitat de celule TUNEL-pozitive cu nuclei marcate - ceea ce confirmă faptul că Ptx singur nu a induce apoptoza.

Între timp, au fost găsite mai multe celule TUNEL-pozitive în talamus și hipotalamusul obținut șoareci tratați cu Gardasil și Ptx ( Figura 3).

De fapt, s-au observat de șapte ori mai multe celule TUNEL pozitive la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx, în timp ce de patru ori mai multe celule apoptotice au fost găsite la șoareci tratați cu Gardasil în monoterapie decât celulele apoptotice la șoarecii vehicul (netratați).

În special, numărul celulelor marcate a fost mai mare în jurul celui de-al treilea ventricul și la vasele din PVN și DMH. Împreună, aceste date susțin o asociere între apoptoză și deteriorarea structurilor neuronale murine cauzate de administrarea vaccinului HPV și Ptx.

Figura 3: Detectarea apoptozei prin TUNEL în creierul șoarecelui. Celulele apoptotice sunt indicate prin săgeți. Scară bar, 500 μm și 50 μm.

Imagine de dimensiune completă

Identificarea celulelor apoptotice

Apoi, am căutat să determinăm ce tipuri de celule au fost afectate de apoptoză.

Deoarece celulele apoptotice au fost observate în jurul vaselor, am marcat secțiuni folosind markeri pentru celule endoteliale vasculare, pericyte și astrocite. Celulele care exprimă CD31 au fost în concordanță cu celulele apoptotice legate la vase ( fig.4 ), în timp ce celulele care exprimă NG2- sau GFAP nu au fost colorate.

Rezultatele arată că vaccinul HPV a indus apoptoza celulelor endoteliale vasculare.

Figura 4: Imunohistochimia brațelor anterioare ale șoarecilor vaccinați. Secțiunile de momeală din șoarecii tratați cu vaccin și Ptx au fost colorate cu anti-CD31, NG2 și GFAP. Scară de bare, 20 μm.

Imagine de dimensiune completă

Neurotransmisia în regiunile circumventriculare

În cele din urmă, pentru o mai bună înțelegere a leziunilor neuronale în administrarea combinată a vaccinului HPV și a șoarecilor Ptx, am evaluat subtipurile interneuron în regiunile circumventriculare ( Fig.5 ). Ca rezultat al colorării imune, tirozina hidroxilaza (TH) a fost crescută în PVN, în special nucleele arcuite, la șoarecii tratați cu Gardasil și Ptx comparativ cu zona șoarecilor vehicul. Pe de altă parte, decarboxilaza acidului glutamic (GAD) 67 și acidul gama-aminobutiric (GABA) a fost scăzută în PVN. Expresia glutamin sintetazei, colina acetiltransferaza nu a fost schimbata. Aceste rezultate au arătat că neuronii dopaminergici au fost crescuți în nucleele arcuite, în timp ce neuronii GABAergici au fost reduse.

Figura 5: Imunofaringizarea interneuronului în regiunile circumventriculare. Secțiunile din creierul anterior din șoarecii tratați cu vaccin HPV și Ptx au fost colorați cu anti-TH, GAD67, cholină acetiltransferază (CA) și sintetază de glutamină (GS). Scară de bare, 500 μm.

Imagine de dimensiune completă

Discuţie

În acest studiu, am demonstrat că administrarea combinată a Gardasil și Ptx a indus o mișcare slabă a cozii și o mobilitate scăzută a locomotivelor. În plus, vaccinarea nu a avut efect asupra forței musculare. Observația neuropatologică relevă următoarele rezultate; (1) leziuni structurale la PVN, DMH, (2) atrezia ventriculară treia, (3) o creștere a apoptozei în jurul cavităților talamusului și hipotalamusului; celulele endoteliale vasculare din hipotalamus au fost afectate în mod special și (4) creșterea sintezei TH și scăderea sintezei GABA în nucleele arcuite.

Mobilitatea scăzută a locomotivelor șoarecilor din grupa 4 ( fig.1 ) a fost derivată din întreruperea rețelelor motorii hipotalamice, deoarece modificările patologice au fost discret localizate la structurile circumventriculare ( Fig.2 ), iar forța musculară a fost normală. Mai multe experimente pe animale au evidențiat importanța hipotalamusului pentru comandarea motorului și indică faptul că semnalele de comandă hipotalamice sunt responsabile în primul rând de conducerea locomoției și că pasul locomotor este mediat de hipotalamusul perimorfian și lateral 22 , 23 , 24 , locomoția și salturile scăpate sunt mediate de hipotalamus medial 25. Hipotalamusul are, de asemenea, un rol important în integrarea circuitelor neuronale pentru reglarea motorului, cu conexiuni la cortexul cingular al motorului în sistemul limbic, care se proiectează spre maduva spinării și nucleul roșu și au funcții premotor 26 . Deoarece mobilitatea scăzută a corpului asupra mișcărilor locomotive poate fi observată frecvent și la pacienții care suferă de HANS, am presupus că deficiențele locomotive atât în ​​fenotipul motor murin cât și în HANS uman sunt legate de zonele motorii hipotalamice perturbate.

Ventriculele cerebrale sunt umplute cu CSF și constituie o rețea de comunicare ce leagă cavitățile 27 . Datele noastre sugerează că vaccinarea împotriva HPV poate induce apoptoza celulelor endoteliale vasculare și poate perturba barierele BBB-CSF. Mai mult, îngustarea ventriculului ar fi putut fi cauzată de prăbușirea barierelor dintre creier și ventriculi, determinând CSF să curgă din creier 28 . CSF este important pentru menținerea homeostaziei creierului, iar îngustarea ventriculilor este adesea observată la pacienții care suferă de sindromul hipotensiunii intracraniene (ICH). Ca și mecanismul propus pentru îngustarea ventriculului observat în studiul actual, ICH este cauzată de scurgerea CSF și presiunea scăzută a CSF 29. Interesant, unele dintre aceste simptome clinice sunt experimentate de persoanele care suferă de HANS, cum ar fi cefaleea ortostatică, amețeli, rigiditate și așa mai departe 30 . Deși în prezent nu există informații patologice cu privire la HANS, ar putea fi important să se investigheze efectele vaccinării asupra funcției CSF și a caracteristicilor patologice din jurul celui de-al treilea ventricul în viitor.

În mod surprinzător, NK2 Homeobox 1 (Nkx2.1), cunoscut și ca șoareci cu deficit de factor de transcripție pentru factorul 1 de tiroidă (TTF-1), a fost stabilit și prezintă trăsături morfologice similare, inclusiv afectarea structurală a PVN și DMH și a atresia treilea ventricular la la șoarecii tratați cu vaccin în acest studiu. Nkx2.1 a fost identificat ca un factor de transcripție pentru factorii specifici tiroidieni 31 , 32 și a fost de asemenea stabilit ca un factor important pentru dezvoltarea creierului timpuriu 33 . Nkx2.1 este exprimată în regiunea ventrală a creierului prealabil 34 , 35. La șoarecii cu deficit de Nkx2.1, se observă anomalii în regiunile ventrale și medii ale hipotalamusului, cel de-al treilea ventricul este îngustat și nu ajunge la podeaua diencefalului 36 . Nkx2.1 este de asemenea cunoscută ca fiind exprimată în regiunea hipotalamică și în zonele periventriculare de la faza incipientă a dezvoltării la adulți 35 . În plus, se consideră că Nkx2.1 joacă roluri în pubertate și în funcția de reproducere și în schizofrenia 35 , 37 , 38 . La om, mutațiile genei Nkx2.1 pot provoca o corecție ereditară benignă (BHC) 39 , 40, o boală care afectează creierul, plămânii și tiroida. Pacienții cu această mutație suferă de o coreeană, o varietate de caracteristici neurologice, tremor, distonie axială și tulburări de mers 41 . Luând în considerare literatura de specialitate, datele noastre actuale sugerează că vaccinul HPV poate perturba calea de semnalizare mediată de Nkx2.1 care este exprimată în regiunea hipotalamică. Am studiat pe producerea neurotransmițătorilor , în scopul de a confirma corelarea fiziopatologic Nkx2.1, deoarece unele studii au indicat anomalii ale mai multor neurotransmitatori producției în Nkx 2.1 cu deficit-soareci in dezvoltarea timpurie 42 , și de asemenea la soareci adulti 35 , 38. Am găsit un fenotip similar al producției de neurotransmițători la șoarecii din grupa 4, inclusiv creșterea neuronilor dopaminergici și a neuronilor GABAergici redus ( Figura 5 ). Aceste rezultate pot explica simptomele sistemului endocrin în sindromul HANS.

Am arătat recent că funcțiile hipotalamusului sunt implicate în studiile clinice prin HANS. Testele funcției endocrine au arătat rezultatele care sugerează disfuncția hipotalamică. Tulburările HANS nu sunt de origine psihogenică, ci provin de la tulburările neuro-endocrinologice ale hipotalamusului și ale rețelelor sale limbice 15 . Mai mult, s-au acumulat dovezi care indică faptul că hipotalamusul este preocupat de anumite elemente de comportament / emoție 22 , 24 , 25 și important pentru reglarea durerii 43 , 44. PVN și DMH, afectate în modelul nostru HANS murin, controlează integral autonom, endocrin și joacă un rol important în întreținerea homeostatică pentru aceste funcții. Progresele recente în neuroștiință au evidențiat importanța PVN pentru plasticitatea sinaptică legată de stres în hipotalamusul 45. DMH și nucleul suprachiasmatic (SCN) au rolul lor în controlul circadian al somnului și, respectiv, în stimulatorul cardiac circadian, respectiv. Leziunile DMT excitotoxice reduc ritmul circadian al activității de veghe, hrănire și locomotor. Prin urmare, am presupus că focalizarea probabilă în HANS ar trebui să fie pe hipotalamus și organele circumventriculare din jurul ventriculului treilea, caracterizată de barieră hematoencefalică, întâmplător acele rapoarte clinice despre funcțiile hipotalamusului sunt în concordanță cu datele noastre folosind modelul de șoarece.

În concluzie, studiul nostru a arătat că expunerea CNS la vaccinul HPV poate induce degenerarea neuronală și poate duce la disfuncții motorii la șoareci C57 / BL6, care sunt similare cu simptomele clinice asociate cu vaccinarea HPV 9 , 10. Mai mult, co-injectarea de Ptx induce deteriorări hipotalamice asociate cu disfuncții motorii la o frecvență mai mare. Este posibil să observăm că numai vaccinul HPV are ca rezultat un fenotip mai slab; mai degrabă, o tulpină de șoarece care este o tulpină hiper-susceptibilă în reacția sa imună (de exemplu, C57BL6) și adăugarea de Ptx care dăunează BBB sunt necesare. S-ar putea să existe fete hipersensibile la vaccinul HPV din cauza factorilor predispozanți neclare și / sau a evenimentelor concomitente de mediu care cauzează probabil o deteriorare a BBB (similar cu leziunea indusă de Ptx în studiul actual). O combinație variabilă a acestor factori poate duce la suferința individuală de la HANS. Sunt necesare analize suplimentare pentru verificarea acestei posibilități;

Metode aplicate pe Șoareci

Șoareci C57BL / 6 de sex feminin în vârstă de șase săptămâni au fost achiziționați de la Sankyo Laboratory (Japonia) și au fost utilizați pentru studiile de vaccinare. Șoarecii au fost ținute în condiții standard în instalația de animale de la Tokyo Medical University și au fost înzestrate cu hrană și apă ad libitum. Toate experimentele pe animale au fost aprobate de Comitetul pentru îngrijirea și utilizarea animalelor instituționale al Universității Medicale din Tokyo (numerele de aprobare: s-27050 și s-28039) și au fost realizate în conformitate cu liniile directoare instituționale, științifice și naționale pentru experimentarea pe animale.

Reactivi și anticorpi

Antigenul pentru encefalomielita autoimună experimentală (EAE) și toxina pertussis (Ptx) au fost achiziționate de la Hook Laboratories, iar vaccinul HPV Gardasil a fost achiziționat de la MSD KK Următorii anticorpi au fost utilizați în acest studiu: anti-NG2, anti-GAD67 și anticorpi anti-tirozină hidroxilază de la Merck Millipore (Germania); anti-GFAP, CD31, anticholină acetiltransferază și sintetază anti-glutamină de la Abcam (Cambridge, UK); anticorp anti-GABA de la Sigma-Aldrich.

Vaccinare

Grupuri de șoareci femele C57BL / 6 în vârstă de 11 săptămâni au fost administrați intramuscular 100 pl de Gardasil sau soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) pentru un total de cinci ori. Ptx a fost administrat intraperitoneal 2 și 24 de ore după imunizare. Vaccinul Gardasil sau Ptx au fost administrate la intervale de 2 săptămâni sau respectiv 4 săptămâni. Ca martor, EAE a fost indusă cu glicoproteina oligonendrocyte mielină 35-55 (MOG 35-55 ) urmată de instrucțiunile producătorului (Hooke Laboratories, USA). Gravitatea bolii a fost evaluată în conformitate cu următoarele scoruri 19; 0, fără anomalie; 1 coada parțială; 2, pierderea tonicității cozii; 3, paralizie parțială a membrelor posterioare; 4, paralizie a membrelor posterioare complete; 5, paralizie anterioară sau moribundă; 6, moarte. A fost evaluat cel mai sever simptom al fiecărui șoarece pe parcursul studiului.

Histologie

Șoarecii au fost anesteziați și transcardiali perfundați cu PBS și formaldehidă 10% în PBS. Creierele au fost apoi îndepărtate, fixate în formaldehidă 10% și încorporate în parafină. Au fost obținute secțiuni de 5 micrometri și au fost deparafinate. Pentru analizele morfologice generale au fost utilizate colorații hematoxilină și eozină (H & E) și Klüver-Barrera (KB). Pentru imunohistochimie, am efectuat regăsirea antigenului prin încălzirea secțiunilor în tampon citrat și stingerea activității peroxidazei endogene prin incubarea secțiunilor în peroxid de hidrogen 3%. Secțiunile au fost blocate cu albumină serică de bovină 10% (BSA) în PBS și incubate cu anticorpi primari. După incubarea cu anticorpi secundari conjugați cu peroxidază de hrean (HRP), anticorpii legați au fost detectați cu 3,3-diaminobenzidină. Secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină,

Analiza TUNEL

Creierele de șoarece au fost fixate în formaldehidă 10% în PBS și au fost încorporate parafină. Secțiunile s-au tăiat la 5 pM și s-au deparafinizat utilizând o procedură standard. Testarea TUNEL a fost efectuată utilizând un kit de detectare a apoptozei in situ (Takara bio Inc. Japonia), secțiunile colorate au fost contracarate cu hematoxilină.

Sursa: Nature.com - Murine hypothalamic destruction with vascular cell apoptosis subsequent to combined administration of human papilloma virus vaccine and pertussis toxin


(Fluierul)


Linkul direct catre Petitie

CEREM NATIONALIZAREA TUTUROR RESURSELOR NATURALE ALE ROMANIEI ! - Initiativa Legislativa care are nevoie de 500.000 de semnaturi - Semneaza si tu !

Comentarii:


Adauga Comentariu



Citiți și cele mai căutate articole de pe Fluierul:

Trădătorii nu se lasă până nu ne dau resursele naturale care sunt ale noastre 100%, ȘI MAI PE NIMIC.Klaus Iohannis și secretarul pentru Energie al SUA au discutat despre resursele de gaz din Marea Neagră. Oficialul american s-a întâlnit și cu Liviu Dragnea

A treia încercare a Statului Paralel Progresist de a prelua controlul în PSD. Balanța forțelor înainte de votul din CExN: 20 de filiale îl susțin pe Dragnea, iar 13 organizații îi cer demisia. Multe formațiuni județene sunt indecise

Mihai Fifor: În calitate de vicepreşedinte PSD şi membru al guvernului am obligaţia de a fi alături de premierul Viorica Dăncilă

Planul britanic este mort, spune Tusk, iar Macron i numește mincinoși pe adepții Brexit-ului

UPDATE. UEDZI REVINE ÎN A PATRA ZI SI VREA SA TREACA PE PLUS. Pariuri sportive. Meciuri din 15 septembrie 2018 (fără englezi care sunt în teste de AI) alese și pariate de UEDZULA alintat UEDZI, programul de inteligență artificială al Fluierul.ro

Bogdan Hossu: Salariul minim va creşte cu 150 de lei de anul viitor

Surpriză pentru Halep: "Bine ai venit!" FOTO | Ce a găsit Simona în camera de hotel de la Wuhan

TOP 10 cele mai bune ACTRIŢE PORNO din istorie. Sau cum sunt manipulați tinerii de mici FOTO

SEX TAPE made in Romania: 4 vedete autohtone FILMATE făcând perversităţi VIDEO

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

Traian Băsescu dă verdictul în războiul PSD: Dragnea va câştiga, Firea va pierde

ULTIMA ORĂ: Țiriac nu uită și nu iartă! Un nou atac frontal la Serena: "Sexism? După două zile era absolut nudă pe copertă, vai de mine!"

Trump anunță identificarea primilor militari americani ale căror rămășițe au fost repatriate din Coreea

Rădulescu o acuză pe Firea de izbucnirea scandalului din PSD: Vinovata principală este această Peron a României

Tanzania: Cel puțin 42 de morți după scufundarea unui feribot, posibil peste 200 de victime

SUA sancționează China pentru achiziționarea de armament rusesc; ținta este de fapt Moscova (sursă Reuters)

Mii de oameni se adună în Barcelona pentru a marca un an de la votul pro-independență a Cataloniei

SUA sancționează agenția militară din China pentru achiziționarea de arme rusești

LIVE BLOG Europa League | Keșeru a marcat în Ludogoreț - Leverkusen! Sazlburg conduce deja cu 2-0 pe Leipzig! PAOK a pierdut cu Chelsea, Standard Liege a fost zdrobită de Sevilla

ORGIE în toaleta unui club din România. Totul a fost filmat cu un telefon mobil. VIDEO

O elevă de 9 ani, mpușcată mortal n Mogadishu. Patru soldați somalezi au fost reținuți

ȘTIRILE MEDIAFAX

Cererea de deschidere a insolvenței Complexului Energetic Hunedoara, repusă pe rolul CA Alba Iulia

Şoferul care a agresat un poliţist în Craiova a fost arestat preventiv

Prezentatoare TV în sânii goi, după ce a fost trădată de rochie în direct VIDEO

India: O fată de 7 ani a fost violată, acest incident nscriindu-se ntr-o serie de atacuri mpotriva fetelor

Utile:Cistita interstițială: cauze, simptome și tratament;Laptele de MIGDALE, alternativa vegetală, plină de vitamine și antioxidanți. Este foarte sănătos și att de simplu de preparat acasă;Avocado: cum l alegem și cum l consumăm

​Caru cu vedete:​Iulia Albu, la Milan Fashion Week. Participanții au fost uimiți de machiajul strident și vestimentația inedită;E oficial! Ed Sheeran va concerta pentru prima oara in Romania;Alain Delon a suferit o operație grea n secret

Bancul zilei: Sfaturi practice pentru mămici preocupate

Parlamentul Ucrainei înscrie în Constituție obiectivele de aderare la NATO și UE

Directorul, SEX cu profa de matematică în şcoală. Elevii au filmat pe ascuns. VIDEO XXX

Doliu în lumea sportului! S-a stins din viață un cvadruplu campion olimpic

O societate canadiană recrutează amatori pentru a testa cannabisul

SUA: O curte federală a decis că nu i se poate refuza pașaportul unui veteran intersex

Au făcut sex în restaurantul plin de oameni. Ce a făcut ospătăriţa când i-a văzut VIDEO XXX

LIVE BLOG Europa League | Keșeru a marcat în Ludogoreț - Leverkusen! PAOK a pierdut cu Chelsea, Standard Liege a fost zdrobită de Sevilla

Mihai Fifor: Mine nu voi fi participa la CEx. Cu multă nțelepciune putem găsi rezolvarea

Dan Matei Agathon: Patronatul Național Român susține noua lege a pensiilor; e o lege bună

Mihai Tudose: Podul peste Dunăre se va face, suntem în termen. Evident că nu toată lumea e fericită

Avioane de vnătoare din Marea Britanie și Franța, mobilizate pentru interceptarea unor aeronave ruse

Răzvan Marin a greșit decisiv în Sevilla – Standard Liege! VIDEO Faza în care le-a făcut "cadou" golul spaniolilor

Cele mai puternice femei ale zodiacului. Zodia ta pe ce loc este?

LIVE BLOG Europa League | Chelsea este în avantaj la Salonic! Sevilla ia distanță față de Standard! Lazio conduce, Rapid Viena se zbate în gol cu Spartak Moscova

Fostul premier Mihai Tudose, ales preşedinte al PSD Brăila

Constanța: Liderul județean al PSD, Felix Stroe, mandatat să îl susțină în continuare pe Liviu Dragnea

LIVE BLOG Europa League | Chelsea este în avantaj la Salonic! Două goluri în două minute în Sevilla - Standard Liege

LIVE BLOG Europa League | Înfrângere dramatică pentru Ludogoreț! AC Milan a câștigat la limită pe terenul lui Dudelange. Meci dramatic între Leipzig și Salzburg. Toate rezultatele din UEL sunt AICI!

Fântânile din Piața Unirii din București au fost redeschise cu un spectacol multimedia

În Brăila, alegerile pentru conducerea filialei PSD au fost câștigate de Mihai Tudose, un susținător al scrisorii anti-Dragnea

Cel puțin 44 de persoane s-au înecat în urma scufundării unui feribot în Lacul Victoria din Tanzania

PAOK Salonic - Chelsea 0-1 în Grupa L din Europa League. Debut ratat pentru Răzvan Lucescu

LIVE BLOG Europa League | Înfrângere dramatică pentru Ludogoreț! AC Milan a câștigat la limită pe terenul lui Dudelange. Meci dramatic între Leipzig și Salzburg. Toate rezultatele din UEL sunt AICI!

LIVE BLOG Europa League | Răzvan Marin, Andrei Ivan și Alin Toșca sunt titulari. Chelsea a deschis scorul la Salonic. Steven Gerrard, luat tare de Villarreal

Percheziţii în Giurgiu şi Vedea la membri ai clanului Butoane. 11 persoane, duse la audieri

Higuain, remediul pentru luxemburghezii de la Dudelange! Italienii au avut probleme cu "zidul" de care s-au lovit Țucudean și Omrani. Cronica meciului

Ion Ţiriac pregăteşte o SUPERLOVITURĂ. "Mă duc să vorbesc cu primarul!"

Judo: Japonezul Naohisa Takato și-a păstrat titlul mondial la categoria -60kg

Ministrul Apărării, Mihai Fifor, anunță că NU va participa la CExN de vineri. Ce mesaj le transmite colegilor

Liderul "rebel" Paul Stănescu i-a transmis un mesaj lui Dragnea. Vicepreședintele PSD a anunțat și că i-a cerut premierului Dăncilă să asigure interimatul la conducerea partidului

Decizii nemiloase luate de Bratu! Patru jucători, OUT pentru următoarea partidă din campionat

Zodiac CHINEZESC săptămânal 24-30 septembrie 2018. NOUL SFAT din înţelepciunea chinezească

Al doilea turneu WTA din România!? Țiriac anunță orașul în care poate fi organizat: "Mă duc să vorbesc cu primarul"

Harta taberelor din PSD, naintea Comitetului Executiv / Luptă strnsă ntre contestatarii și susținătorii lui Dragnea / Ultimele mutări

Elena Udrea, prima declaraţie după ce a devenit MAMĂ. De ce fetiţa s-a născut MAI DEVREME

SUA/ Incident armat în Maryland: Mai mulți morți și răniți

Controverse privind programul CASA VERDE: Materialele folosite sunt CANCERIGENE

Reguli noi de anul viitor pentru personalul bugetar aflate n delegație sau n detașare

Deloc OK! PAOK-ul lui Răzvan Lucescu, cu Toșca titular, pierde cu 1-0 pe teren propriu în fața lui Chelsea. Atmosferă superbă la Salonic

Kim Jong Un dorește un al doilea summit cu Donald Trump în viitorul apropiat, afirmă președintele sud-coreean

Care este poziția celor 27 n privința negocierilor Brexit? / Romnia este preocupată de un Brexit fără acord

Președintele sud-coreean: Kim Jong-Un vrea un nou summit cu Donald Trump

Şefii Jandarmeriei, chemaţi la Parchet pentru complicitate la abuz în serviciu în dosarul mitingului din 10 august

Un fost ministru al Transporturilor îl atacă pe Bădălău: Despre el se pot spune atât de multe, mai puțin că are caracter

LIVE BLOG Europa League | Chelsea este în avantaj la Salonic! Sevilla ia distanță față de Standard! Lazio și Rapid Viena conduc!

Președintele Poloniei numește 10 judecători la Curtea Supremă în ciuda amenințării cu sancțiuni din partea UE

Fotbal: Grecul Kyros Vassaras rămâne președinte al Comisiei Centrale a Arbitrilor din cadrul FRF

Moment incredibil pe Toumba! FOTO | Președintele lui Chelsea a intrat în tribună înainte de meci, iar momentul e viral pe internet

Higuain, remediul pentru luxemburghezii de la Dudelange! Italienii au avut probleme cu "zidul" de care s-au lovit Țucudean și Omrani. Cronica meciului

Accident de muncă în Spania. O româncă a fost strivită de un motostivuitor

LIVE BLOG | Începe spectacolul grupelor Europa League. Răzvan Marin, Andrei Ivan și Alin Toșca sunt titulari. Echipele de start

Roxana Vancea, altfel decât o ştiai. Ce note a luat bomba-sexy la BACALAUREAT

DOCUMENT Firme germane și romnești: Salariile sunt mici n Romnia, ceea ce atrage investiții

Cine face jocurile în Comitetul Executiv al PSD. Ce poate decide forul de conducere în cazul Dragnea

Spor de 15% pentru anumiţi angajaţi din sectorul bugetar. Hotărârea, în ultima şedinţă de guvern. DOCUMENT

O fostă majoretă a făcut SEX cu un elev de 15 ani! Filmul XXX a ajuns pe INTERNET. VIDEO

Actorul Ashton Kutcher a lovit cu mașina un tânăr

"Revenge porn": Facebook va tăgui fotografiile compromițătoare ale utilizatorilor

Mai mult de 20 de pasageri al unui zbor intern din India au suferit leziuni ușoare

Casa Albă amenință cu atacuri împotriva infractorilor informatici

VIDEO Proteste masive in Sibiu: Hotii cu mustata ne-au furat pe fata

ADVERSARI STEAUA (FCSB) în Europa League: Tragere la sorţi de coşmar pentru primăvara europeană

Casa Albă se angajează să intensifice ofensiva cibernetică împotriva hackerilor

Ambasadorul SUA, Hans Klemm, va primi Decorația regală 'Nihil Sine Deo'

Adolescentă VIRGINĂ, însărcinată în 19 săptămâni. Medicii au confirmat totul

Ambasadorul SUA: Slabirea legislatiei anti-coruptie poate expune Romania la amenintari venite din partea Rusiei

Parlamentarii PMP au depus 3.318 amendamente la proiectul Legii bugetului de stat pe 2018

VIDEO Cabina unui avion Jet Airways s-a depresurizat pentru că echipajul a uitat să acționeze un comutator/ Aproape 30 de persoane au avut nevoie de ngrijiri medicale

Pacientul din Guineea, suspect de febră tifoidă. Medic: Se află într-o stare mai bună. Rezultatele analizelor nu au venit

Mii de persoane au manifestat la Istanbul, zeci de mii - la Rabat, împotriva deciziei SUA privind Ierusalimul

Medalie de argint pentru echipa României la Europeanul de cros din Slovacia. Bîrcă și Bobocel au alergat pentru reprezentativa tricoloră

Un agent de pază dintr-un supermarket a găsit 33.000 euro într-un coș de cumpărături. Ce s-a întâmplat după cinci zile

PNL vrea modificarea legii CCR: să fie verificate motivele emiterii unui OUG naintre de intrarea n vigoare

Răzvan Rotaru (PSD Botoşani): 80 de deputaţi ai partidului susţin demersul prin care i se cere demisia lui Dragnea

Manelistul Dani Mocanu, acuzat de proxenetism, invitat de onoare la un eveniment al Camerei de Comerț

România a urcat în ierarhia FIFA. Poziția ocupată de naționala noastră și cum arată TOP 10

Donald Trump a sugerat Guvernului spaniol să construiască un zid pentru a opri valul de imigranți care ajung în Europa

Dascăli "altoiți" de sistemul educațional. Trei profesori agresați numai în ultima săptămână

Pleșoianu desființează SCRISOAREA din PSD: Lăsați textele de #gâgă. Oricare ar prelua partidul, dacă nu e unealtă, devine țintă

Plic cu peste 33.000 de euro găsit de un agent de pază într-un magazin; banii au fost predați la Poliție

Ipoteză incredibilă lansată de presa din Spania! De ce ar fi fost eliminat Ronaldo în partida cu Valencia: Real Madrid, implicată

Un nou atac armat în Statele Unite. Cel puțin trei persoane au murit, iar atacatorul pare să fie o FEMEIE

Paul Stănescu: Sper ca, după CEx-ul de mine, toți parlamentarii social-democrați care au plecat să revină n PSD

Loto, Loto 6 din 49: Numerele extrase pe 20 septembrie

Emilia Clarke, alias Daenerys Targaryen, s-a dat de gol! Fanii "Game of Thrones" vor aprecia gestul făcut de "Mama Dragonilor" FOTO

Dică povestește cum a fost convins să vină la Viitorul. Un telefon de la "Rege" a fost suficient: "Dicane, vii la Divizia B?"

Drama lui AURELIAN TEMIŞAN. A ajuns de la filmări direct la SPITAL

Wozniacki și anunțul care a pus capăt tuturor speculațiilor! Ce a decis daneza, după ce s-a spus că se retrage din tenis în 2019

Marine Le Pen este obligată de justiția franceză să facă un control psihiatric

Decizia de ridicare a suspendării RUSADA aruncă o umbră asupra credibilității mișcării antidoping (vicepreședinte AMA)

Carmen Iohannis, în Piaţa Mare din Sibiu la un festival inspirat din Oktoberfest


Pag.1 Pag.2 Pag.3 Pag.4 Pag.5 Pag.6 Pag.7
Pag.8

Nr. de articole la aceasta sectiune: 953, afisate in 8 pagini.



ieri 19:44 ȘTIRILE MEDIAFAX
ieri 05:10 CITATUL ZILEI